细胞生物学方法.pptVIP

医学细胞生物学的研究方法;一、显微技术;普通光学显微镜;荧光显微镜;荧光显微镜照片

〔微管呈绿色、微丝红色、核蓝色〕;激光共聚焦扫描显微镜;蓝色为细胞核

绿色为微管;暗视野显微镜;?????;微分干预差显微镜〔DIC);倒置显微镜;透射电子显微镜;工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的外表结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。图像为立体形象，反映了标本的外表结构。为了使标本外表发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。CO2临界点枯燥法防止引起样品变形的外表张力问题。;RER的形态;显微操作/注射仪;二、生物化学与分子生物学技术;免疫细胞化学

根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。

如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反响，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。

常用的标记物有荧光素和酶。

荧光素标记的称为免疫荧光法

酶标记的称为酶标免疫法;显微光谱分析技术

细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。例如，核酸的吸收波长为260nm，而蛋白质的那么为280nm。根据细胞成分所具有的这种特性，可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性，甚至定量测定;放射自显影术

用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。

原理是将放射性同位素〔如14C和3H〕标记的化合物导入生物体内，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，组织中的放射性即可使乳胶感光。显示复原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量。;分子杂交技术

具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA杂交??双链分子。

这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。;Southernblot;PCR技术

聚合酶链式反响〔polymerasechainreaction，PCR〕用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。;PCRCycle：;人类染色体

端粒DNA的

荧光原位杂交;三、细胞别离技术;离心技术－－差速离心;用差速离心法别离已破碎的细胞各组份;?A等速度沉降，B等密度沉降;流式细胞术

流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。

在分析或分选过程中，包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，别离纯度可达99%。

包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计。;细胞电泳

在一定PH值下细胞外表带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动的现象称为细胞电泳。

引起细胞电泳的电位值称为ξ电位。

各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞电荷量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同，因此可用来别离不同种类的细胞。

在恒定的电场条件下，同种细胞的电泳速度相当稳定，因而可通过测定电泳速度来推算出细胞的ξ电位。ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异，因此在诊断疾病上有一定价值。;四、细胞培养与细胞杂交;动物细胞培养;[根本原理];植物细胞培养;正常淋巴细胞具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。;JEM-1011透射电子显微镜;JEOL扫描电子显微镜;图2-3荧光显微镜照片〔微管呈绿色、微丝红色、核蓝色〕

图片来自:///;激光共聚焦扫描显微镜;AcomparisonofyeastcellsthatweregrowingonthevaginalepitheliumseenwithdifferenttypesofLM.

a)underbright-field;

b)phase-contrast;

c)DIC;Examplesofnegtivelystainedandmetal-shadowedspecimens.

Electronmicrographsofatobaccorattlevirus;Hela细胞〔左〕、CHO细胞〔右〕