一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体及其构建方法和应用[发明专利].pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111607612A

(43)申请公布日

2020.09.01

(21)申请号202010426667.3

(22)申请日2020.05.19

(71)申请人深圳市新合生物医疗科技有限公司

地址518055广东省深圳市南山区桃源街

道留仙大道众创产业园B50栋4层

(72)发明人潘有东宋麒王奕肖安万季

刘刚文颖

(74)专利代理机构北京冠和权律师事务所

11399

代理人陈国军

(51)Int.Cl.

C12N15/85(2006.01)

权利要求书2页说明书9页

序列表2页附图3页

(54)发明名称

一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体及

其构建方法和应用

(57)摘要

本发明公开了一种表达体液免疫疫苗mRNA

的质粒载体及其构建方法和应用。该质粒载体包

括能够在待插入表达的体液免疫疫苗位点(B抗

原表位)肽段基因前部5’-端的：血红蛋白β亚基

基因(HBB)的5’-非翻译区、免疫球蛋白重链ε

(IGHE)蛋白信号肽序列；以及基因后部3’-端的：

HBB基因的3’-非翻译区、和长度为60的Poly(dA)

尾部序列。本发明构建的体外表达mRNA的质粒载

体，可以直接将B抗原表位位点插入到表达目标

蛋白基因中，表达的mRNA携带有长度为60的poly

(A)尾部序列，可直接高效翻译为能在哺乳动物

A体内或体外培养细胞中表达分泌到细胞外的B抗

2原表位。

1

6

7

0

6

1

1

1

N

C

CN111607612A权利要求书1/2页

1.一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体，包括B抗原表位表达、定位所需元件的区段

和长度大于30的多聚腺苷脱氧核酸poly

A片段。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述B抗原表位表达、定位所需元件的区段

包括XbaI位点粘性末端、T7

RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、IGHE蛋白的信号

肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV

E蛋白的可移除序列、SacI位点、来自HBB的3’-UTR序

列、XhoI位点粘性末端。

3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述多聚腺苷脱氧核酸poly

A片段的

长度为60。

4.根据权利要求1-3任一所述的载体，其特征在于，还包括pNeoCura-Exp060载体中除

了长度为30的可替换区段及Xhol和Xbal之间序列以外的其它序列。

5.根据权利要求1-4任一所述的载体，其特征在于，还包括启动子序列。

6.根据权利要求1-5任一所述的载体，其特征在于，所述启动子序列为T7。

7.一种根据权利要求1-6任一所述的表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体的构建方法，

包括以下步骤：

S01，使用限制性内切酶XbaI和XhoI将pNeoCura-Exp060载体中长度为30的区段移除；

S02，并连接插入一段带有XbaI位点粘性末端、T7

RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的

5’-UTR、IGHE蛋白的信号肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV

E蛋白的可移除序列、SacI位

点、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端的人工合成序列，构建为pNeoCura-BVac质粒

载体。

8.根据权利要求7