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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN111607612A
(43)申请公布日
2020.09.01
(21)申请号202010426667.3
(22)申请日2020.05.19
(71)申请人深圳市新合生物医疗科技有限公司
地址518055广东省深圳市南山区桃源街
道留仙大道众创产业园B50栋4层
(72)发明人潘有东宋麒王奕肖安万季
刘刚文颖
(74)专利代理机构北京冠和权律师事务所
11399
代理人陈国军
(51)Int.Cl.
C12N15/85(2006.01)
权利要求书2页说明书9页
序列表2页附图3页
(54)发明名称
一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体及
其构建方法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种表达体液免疫疫苗mRNA
的质粒载体及其构建方法和应用。该质粒载体包
括能够在待插入表达的体液免疫疫苗位点(B抗
原表位)肽段基因前部5’-端的：血红蛋白β亚基
基因(HBB)的5’-非翻译区、免疫球蛋白重链ε
(IGHE)蛋白信号肽序列；以及基因后部3’-端的：
HBB基因的3’-非翻译区、和长度为60的Poly(dA)
尾部序列。本发明构建的体外表达mRNA的质粒载
体，可以直接将B抗原表位位点插入到表达目标
蛋白基因中，表达的mRNA携带有长度为60的poly
(A)尾部序列，可直接高效翻译为能在哺乳动物
A体内或体外培养细胞中表达分泌到细胞外的B抗
2原表位。
1
6
7
0
6
1
1
1
N
C
CN111607612A权利要求书1/2页
1.一种表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体，包括B抗原表位表达、定位所需元件的区段
和长度大于30的多聚腺苷脱氧核酸poly
A片段。
2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述B抗原表位表达、定位所需元件的区段
包括XbaI位点粘性末端、T7
RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、IGHE蛋白的信号
肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV
E蛋白的可移除序列、SacI位点、来自HBB的3’-UTR序
列、XhoI位点粘性末端。
3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述多聚腺苷脱氧核酸poly
A片段的
长度为60。
4.根据权利要求1-3任一所述的载体，其特征在于，还包括pNeoCura-Exp060载体中除
了长度为30的可替换区段及Xhol和Xbal之间序列以外的其它序列。
5.根据权利要求1-4任一所述的载体，其特征在于，还包括启动子序列。
6.根据权利要求1-5任一所述的载体，其特征在于，所述启动子序列为T7。
7.一种根据权利要求1-6任一所述的表达体液免疫疫苗mRNA的质粒载体的构建方法，
包括以下步骤：
S01，使用限制性内切酶XbaI和XhoI将pNeoCura-Exp060载体中长度为30的区段移除；
S02，并连接插入一段带有XbaI位点粘性末端、T7
RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的
5’-UTR、IGHE蛋白的信号肽序列、BamHI位点、编码2019-nCoV
E蛋白的可移除序列、SacI位
点、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端的人工合成序列，构建为pNeoCura-BVac质粒
载体。
8.根据权利要求7
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