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小心处理:高导电蛋白样品的Zeta电位测量
相关领域:Litesizer™500,Univette样品池,电泳光散射(ELS),cmPALS技术,蛋白模式,溶菌酶
蛋白质最常在体液或等渗缓冲液中再悬浮。然而,在这种高导电性溶剂上用电泳光散射(ELS)
测量zeta电位可能会导致产生过量热量,进而造成样品降解和电极损伤。本文中,我们使用稳定
且可重复使用的Univette样品池和Litesizer™500来测量溶解在等渗缓冲液中的标准蛋白溶菌酶的
zeta电位。由于cmPALS专利技术和蛋白模式,该模式可以使测量过程短暂中断,使样品冷却下
来,我们能够在不造成电极损伤的情况下获得高重复性的zeta电位测量结果。
用户可以激活一个称为“蛋白模式”的软件功能,它会
在测量zeta电位时引入短暂的中断,从而使样品冷却
下来。
Univette是一种可重复使用的样品池,可用于在高导电
性或有机溶剂中测量zeta电位,它足够坚固,可以承
受这种条件,并且不会造成电极损伤(4)。
本文我们演示了Litesizer™500和Univette的联用性能
,即使用Kalliope™的蛋白模式来测量标准蛋白溶菌酶
在高导电性溶剂中的zeta电位。
2实验方法
用卵清蛋白(Sigma-Aldrich)制备了两种不同的溶菌
酶溶液:
0.1mg/mL,溶于10mMBisTris缓冲液(
1简介CarlRoth)和50mMNaCl(J.T.Baker)1:
1的混合物中。
1.0mg/mL,溶于磷酸盐缓冲液(PBS,
Zeta电位与粒子间斥力有关,通常表征粒子悬浮液特Sigma-Aldrich)中。
性必需测量zeta电位。虽然很多物质可以溶解或分散
向Univette石英样品池中加入900μL样品。第一次测
在去离子水中,但有些粒子需要分散在高导电性的溶剂
量的平衡时间设置为2分钟,连续测量30秒。每个溶
中才能保持其结构,不会降解。这在生物样品中尤其常
液测试3个独立样本,每个样本重复4次,共测试12
见,因为蛋白质、生物医学聚合物和细胞必须溶解在缓
次。表1总结了测量的输入参数。
冲液或等渗缓冲液中。
利用电泳光散射(ELS)来测量zeta电位,这意味着
在样品上应用了电场。这种测量技术的常见弊端是所谓样品浓度0.1mg/ml1mg/ml
的焦耳热,即电流通
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