专题二微生物的培养复习.pptx

专题二微生物的培养复习;(1)固体培养基、液体培养基和半固体培养基

①固体培养基:(观察菌落和分离提纯微生物)

在一般培养温度下呈固体状态得培养基。

一类就是用天然得固体状物质制成得,如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成得培养基,酒精厂、酿造厂等常用这种培养基;

另一类就是在液体中添加凝固剂而制成得,如实验室中常用得琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物得分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征得观察等。

②液体培养基或培养液或发酵液:(工业大规模培养)

呈液体状态得培养基。液体培养基因营养物质分布均匀,与菌体表面接触充分,还能大量溶解微生物得代谢产物等优点,广泛用于微生物得生理、代谢研究以及大规模得工业化生产中。

③半固体培养基:(观察微生物得运动)

加入少量得凝固剂(如0、2％～0、5％得琼脂)而制成得培养基。这种培养基常用于观察细菌得运动、厌氧菌得分离和菌种鉴定等。;(2)天然培养基和合成培养基

①天然培养基:(工业生产降低成本)

主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点就是营养成分丰富,培养效果良好,缺点就是成分复杂,来源受限。天然培养基/液得种类很多,包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固剂(如血浆)等。

②合成培养基:(菌种得分类,鉴定,营养、代谢,遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高得研究)就是通过顺序加入准确称量得高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成得。其所含得成分(包括微量元素在内)以及她们得量都就是确切可知得。;关于选择培养基

(1)基本得培养基通过加青霉素,实现分离纯化酵母菌、霉菌;

(2)加高浓度得食盐分离纯化金黄色葡萄球菌(有高度得耐盐性,可在10~15%NaCl肉汤中生长)

(3)无氮培养基可分离纯化固氮菌(固氮细菌)。

(4)不含有机碳得培养基可分离纯化自养型细菌如硝化细菌。

;(二)培养基配制原则:;;①无机氮源:N2、NH4+氨盐、NO3-硝酸盐、NH3。;牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素。;耐高温需保持干燥得物品,160～170℃1～2小时;1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配??;大家学习辛苦了，还是要坚持;倒平板;1、培养基灭菌后,需要冷却到50℃左右时,才能用来倒平板。您用什么办法来估计培养基得温度？;3、平板冷凝后,为什么要将平板倒置？;㈡纯化大肠杆菌:;将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环_______;;问题讨论;2、在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？;;6支试管，分别加入9ml无菌水;;;2、菌种培养:;四、菌种得保藏:;b、涂布平板:;课题2

土壤中分解尿素得细菌得分离与计数;一、课题背景;4、课题目得;15.0g;②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？;1、显微镜直接计数:;2、间接计数法(活菌计数法)

⑴原理:在稀释度足够高时,微生物在固体培养基上所形成得一个菌落就是由一个单细胞繁殖而成得,即一个菌落代表原先得一个单细胞。

⑵常用方法:稀释涂布平板法。;注意事项

①为了保证结果准确,一般选择菌落数在30——300得平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上得平皿中,经涂布,培养计算出菌落平均数。

③统计得菌落往往比活菌得实际数目低。;设置对照得主要目得就是排除实验组中非测试因素对实验结果得影响,提高实验结果得可信度。;二、实验得具体操作

㈠、土壤取样

从肥沃、湿润得土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好得信封中。

◆取土样用得小铁铲和盛土样得得信封在使用前都要灭菌。

㈡、制备培养基:

制备以尿素为唯一氮源得选择培养基。;◆应在火焰旁称取土壤10g。

◆在稀释土壤溶液得过程中,每一步都要在火焰旁进行;㈣、取样涂布;㈣、取样涂布;㈤、微生物得培养与观察;◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300得平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落得计数,如果同一稀释倍数得三个重复得菌落数相差较大,表明试验不精确,需要重新实验。;;;2、纤维素酶

纤维素酶就是一种复合酶,一般认为她至少包括三种组分,即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。;刚果红染色法;;二、实验设计