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玫瑰花卉组织培养

目录基础知识定义、原理、历史技术要点设备、材料、培养基实验步骤外植体处理、接种、培养条件高级技术

引言：玫瑰的重要性园艺和经济价值全球花卉市场主角香水及化妆品原料观赏及礼品首选传统繁殖方法的局限性扦插繁殖效率低嫁接技术复杂

组织培养的定义和优势无菌条件下的细胞培养技术利用植物细胞全能性进行快速繁殖高效大规模繁殖一年可产数万株遗传一致的植株无病毒种苗生产通过茎尖培养获得无病毒植株不受季节限制

玫瑰组织培养的历史发展11950年代首次尝试玫瑰外植体培养21970年代建立完整再生体系31990年代商业化生产开始421世纪分子生物学技术融合

玫瑰组织培养的基本原理细胞全能性植物细胞具有再生完整植株能力脱分化细胞回归未分化状态重新分化形成芽、根等器官完整植株再生发育成具完整功能的植物

玫瑰组织培养的主要类型茎尖培养无病毒苗生产的首选方法2腋芽培养最常用的商业化生产技术胚培养育种中解决胚败育问题的关键技术

玫瑰组织培养的设备和材料基础设备高压灭菌锅超净工作台培养室精密天平实验工具解剖镜无菌操作工具培养瓶接种针化学试剂大量元素盐微量元素有机物质植物激素

实验室设施要求温控系统恒温25±2℃光照系统2000-3000勒克斯空气净化高效过滤器确保洁净环境纯水系统双蒸或去离子水

培养基的组成无机盐提供植物生长所需的宏量和微量元素碳源通常为蔗糖，提供能量有机添加物维生素、氨基酸等生长因子植物激素调节生长分化方向凝固剂琼脂或明胶，提供支撑

常用激素及其作用生长素NAA、IAA、IBA促进生根、细胞伸长细胞分裂素6-BA、ZT、KT促进芽分化、抑制顶端优势赤霉素GA3促进茎伸长、打破休眠脱落酸ABA诱导休眠、影响胚胎发育

外植体的选择茎尖和幼茎最佳选择，活力强，污染少腋芽商业化生产首选花蕾和花瓣用于特殊研究根和叶片再生能力较弱

外植体采集的最佳时间和方法1选择生长季节春季新梢生长期最佳2挑选健康母株无病虫害，生长旺盛3晴天早晨采集植物细胞饱满，活力高4低温保存运输冰盒临时储存，降低代谢

外植体的消毒步骤流水冲洗去除表面杂质和灰尘肥皂水浸泡去除表面油脂75%酒精快速浸泡30秒，初步消毒次氯酸钠溶液浸泡8-15分钟，主要消毒步骤无菌水冲洗3-5次，去除残留消毒剂

常用消毒剂及其浓度0.1%升汞高效但有毒，接触时间短1-2%次氯酸钠最常用消毒剂，有效安全0.1%漂白粉经济实惠，效果稳定75%酒精快速作用，需控制时间

接种技术和注意事项接种前准备工具灭菌酒精灯点燃紫外灯照射30分钟接种操作要点保持手部消毒工具定期火焰灭菌快速准确操作防止交叉污染接种后处理封口密封标记清晰及时转入培养室

培养条件控制温度白天25±1℃夜间降低2-3℃避免温度波动光照光照强度2000-3000lx光周期16h/8h荧光灯为主湿度培养瓶内湿度约95%室内湿度50-70%防止过度冷凝

初代培养的目标和方法初代培养目标：建立无菌培养系统，诱导外植体存活并分化

初代培养基的配方MS基本盐蔗糖琼脂维生素生长调节剂其他添加物

初代培养中常见问题及解决方案褐化问题添加活性炭0.1-0.3%使用抗氧化剂如VC降低矿物盐浓度污染问题优化消毒方案添加广谱抗生素改进无菌操作技术不分化问题调整激素配比改变光照条件尝试不同基本培养基

继代培养的目的和流程确定适宜时间通常初代培养4-6周后切割分株每丛切为2-3小簇转移新培养基增殖培养基含较高细胞分裂素继续培养生长同样环境条件下培养3-4周

最佳继代培养基配方基本培养基MS全量或WPM蔗糖30g/L琼脂6-8g/LpH值5.6-5.8BA1.0-2.0mg/LNAA0.1-0.2mg/LGA30.5mg/L(可选)

继代培养周期和增殖系数继代次数增殖系数

丛生芽的诱导和培养高细胞分裂素处理使用2.0-4.0mg/LBA1茎段横切多次划伤促进丛生芽形成2低强度光照减轻氧化压力3定期转移培养基保持营养供应4

壮苗培养的重要性提高成活率增强植株抵抗力，提高移栽存活率促进生根能力培养健壮根系，提高养分吸收能力改善叶片质量增加叶绿素含量，提高光合效率增强抗逆性提前适应外界环境，减少移栽应激

壮苗培养基的选择1降低营养浓度使用1/2MS或1/4MS基本盐2减少蔗糖含量15-20g/L，刺激光合作用3降低凝固剂改善根系生长环境4添加硅元素提高细胞壁强度

生根培养的关键因素生长素处理IBA、NAA刺激根原基形成暗培养处理初期黑暗条件促进生根培养基调整低盐、低糖、高通气性

生根培养基的优化

不同激素对生根的影响IBA(吲哚丁酸)生根率高根系发达适合浸泡处理最佳浓度0.5-1.5mg/LNAA(萘乙酸)诱导速度快持续性强易导致愈伤组织最佳浓度0.1-0.5mg/LIAA(吲哚乙酸)天然生长素生根效果温和稳定性较差最佳浓度1.0-2.0mg/L

生根率提高