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简述

紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是在190-800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和含量测定的方法。

定量分析通常选择物质的最大吸取波特长测出吸光度，然后用比照品或吸取系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对物质定性可用吸取峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；假设该物质本身在紫外光区无吸取，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸取，或杂质的吸取峰处该物质无吸取，则可用本法作杂质检查。

物质对紫外辐射的吸取是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸取主要打算于分子的电子构造，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子构造中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区〔200~400nm〕或可见光区

〔400~850nm〕产生吸取。通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190~900nm。

紫外吸取光谱为物质对紫外区辐射的能量吸取图。朗伯-比尔〔Lambert-Beer〕定律为光的吸取定律，它是紫外-可见分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为:

1

式中A为吸光度;

T为透光率;

E为吸取系数;C为溶液浓度;L为光路长度。

A=logT

=ECL

如溶液的浓度〔C〕为1%〔g/ml〕，光路长度〔L〕为lcm，相应的吸光度即为吸

收系数以E1%表示。如溶液的浓度〔C〕为摩尔浓度〔mol/L〕，光路长度为lcm

1cm

时，则相应有吸取系数为摩尔吸取系数，以ε表示。

仪器

紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系

统和数据处理系统等局部组成。

为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用自然石英或熔融硅石制成，对200~40Onm波长光的色散力量很强，对600nm以上波长的光色散力量较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而到达色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。

检测器有光电管和光电倍增管二种。

紫外-可见分光光度计依据其构造和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸取度，操作比较费时，用于绘制吸取光谱图时很不便利，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成样品〔S〕和参比〔R〕两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分别成两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简洁，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。

紫外-可见分光光度计的检定

波长准确度

波长准确度的允差范围紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1.0nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4.8nm。

波长准确度检定方法

用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯〔用笔式汞灯最便利〕直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，承受波长扫描方式，扫描速度“慢”〔如l5nm/min〕、响应“快”、最小狭缝宽度〔如0.lnm〕、量程0~100%，在200~800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值〔假设仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波进步行“单峰”扫描〕。