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医学课件-组织细胞的处理汇报人：XXX2025-X-X

目录1.组织细胞的采集与保存

2.组织细胞的固定与脱水

3.组织细胞的透明与包埋

4.组织细胞的切片与染色

5.组织细胞的显微镜观察

6.组织细胞的免疫组化技术

7.组织细胞的分子生物学技术

8.组织细胞的细胞培养技术

01组织细胞的采集与保存

组织细胞的采集方法采集器械采集组织细胞前需准备合适的器械，如组织剪、镊子、培养皿等。选择合适的器械可减少组织损伤，保证细胞活性。例如，组织剪的锋利程度直接影响剪裁效率。组织定位准确找到采集部位对于细胞采集至关重要。使用显微镜等设备辅助定位，提高采集效率。通常，在显微镜下观察细胞形态和分布，确定最佳采集点，如组织切片厚度需在1-5微米之间。采集操作采集过程中，需遵循无菌操作原则，避免污染。使用消毒后的器械进行组织切割，速度要适中，避免过快造成细胞损伤。在培养皿中收集组织碎片，迅速进行细胞分离。采集量根据实验需求而定，一般以1-2克的组织为宜。

组织细胞的保存条件温度控制组织细胞保存温度至关重要，通常应保持在4℃左右。低温可减缓细胞代谢，减少细胞损伤。长期保存时，可采用-80℃冰箱或液氮保存，以更有效地保护细胞活性。pH值调节适宜的pH值有助于维持细胞内环境的稳定。细胞保存液的pH值通常调节至7.2-7.4之间，与细胞内环境pH值相近，有利于细胞复苏后的恢复。营养物质补充细胞保存液中需添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，以提供细胞代谢所需的能量。同时，添加适量的抗生素，防止污染。此外，适当的血清成分也能增强细胞的保存效果。

组织细胞的保存方法液氮保存液氮保存法是将组织细胞置于-196℃的液氮中，细胞代谢几乎停止，可长期保存。适用于珍贵细胞株的保存，如干细胞等。保存前需将细胞悬浮于含保护剂的保存液中，如DMEM培养基加10%血清。冷冻保存冷冻保存法是将细胞悬液置于-80℃冰箱中，适用于短期保存。保存前需将细胞悬液加入适量的冷冻保护剂，如二甲基亚砜（DMSO），以防止细胞损伤。保存时间一般为1-6个月。冻干保存冻干保存法是将细胞悬液冷冻后，在真空条件下去除水分，形成干燥的细胞粉。这种方法适用于长期保存，且操作简单。保存前需将细胞悬浮于适量的冻干保护剂中，如甘露醇，以防止细胞损伤。

02组织细胞的固定与脱水

固定剂的选择与使用固定剂类型常用的固定剂有甲醛、戊二醛和丙酮等。甲醛固定剂对细胞损伤较小，适用于一般细胞固定；戊二醛固定效果较好，但可能对细胞有一定毒性；丙酮固定速度快，适用于快速固定。固定浓度固定剂浓度通常在1-4%之间，具体浓度取决于细胞类型和固定时间。一般而言，固定时间越长，固定剂浓度越高。例如，戊二醛固定液浓度为2-4%，固定时间为15-30分钟。固定时间固定时间根据细胞类型和固定剂浓度而定，一般为15-30分钟。固定时间过长可能导致细胞结构破坏，固定时间过短则可能固定不完全。例如，甲醛固定通常需要30分钟，而戊二醛固定则需15-30分钟。

脱水过程与注意事项脱水剂选择脱水过程需选择合适的脱水剂，如乙醇、丙酮等。乙醇因其毒性较低，常用于细胞脱水。脱水剂浓度通常从30%逐步递增到100%，每步停留时间约15-30分钟，以避免细胞过度脱水。脱水速度控制脱水速度不宜过快，以免细胞结构破坏。脱水剂更换时应逐渐进行，如从70%乙醇过渡到100%乙醇，每步之间需停留足够时间，确保细胞均匀脱水。整个过程需在通风良好的环境中进行。脱水后处理脱水完成后，需将组织细胞进行透明处理，常用透明剂为苯酚或苯甲酸。透明剂浓度从低到高逐步增加，直至细胞完全透明。透明处理完成后，进行包埋，以备后续切片和染色等操作。

固定与脱水后的组织处理透明处理固定与脱水后的组织需进行透明处理，以去除脂质，便于后续包埋。常用透明剂为苯酚或苯甲酸，透明剂浓度从低到高逐步增加，每步停留时间约30分钟，直至组织完全透明。包埋操作透明后的组织需进行包埋，以固定组织结构。常用的包埋材料有石蜡和树脂。石蜡包埋适用于常规切片，而树脂包埋适用于超薄切片。包埋时需注意温度控制，避免组织变形。切片准备包埋后的组织块需进行切片，切片厚度根据实验需求而定，通常为5-10微米。切片前需将组织块进行脱蜡处理，去除包埋材料，然后进行水化，以便后续染色和观察。

03组织细胞的透明与包埋

透明剂的选择与使用透明剂种类透明剂包括苯酚、苯甲酸和苯等。苯酚因其成本低、透明效果好而被广泛应用，但毒性较大，使用时需小心。苯甲酸透明效果好，毒性较低，适用于多种细胞类型。浓度梯度透明剂的使用需进行浓度梯度处理，通常从低浓度（如30%）开始，逐步增加到高浓度（如100%），每步停留时间约30分钟，以确保细胞均匀透明。使用注意事项使用透明剂时，应注意避免与皮肤直接接触，操作应在通风柜中进行。同时，透明剂