微生物鉴定技术在药品检验及监管中的应用.ppt

上海市食品药品检验所;;一、背景介绍;对微生物分类水平较低，只能鉴定

到“属〞，鉴定微生物种类有限;;微生物变异能力强，生化反响准确

度不高，错检漏检现象普遍;生化反响鉴定主要是利用不同微生物自身所特有的不同酶系统，根据微生物利用分解底物的种类和营养来源进行分类鉴定。在大多数情况下，同“属〞微生物的酶系统根本相同，可以到达鉴定的目的微生物DNA突变能力强，如果这些突变点涉及到微生物酶系统的表达，就会造成酶活性降低甚至酶缺陷，导致鉴定失败

在现行国家标准中，只有血浆凝固酶阳性反响才会被确证为金黄色葡萄球菌阳性，阴性反响的微生物那么被作为无害菌处理。然而，近几年引起高度关注的血浆凝固酶阴性金黄色葡萄球菌的流行使得金黄色葡萄球菌被漏检，血浆凝固酶阴性金黄色葡萄球菌往往含有肠毒素和其他毒素，是引起医院感染、社区食物中毒的重要污染源。;不能对微生物污染进行准确溯源分析;在进化过程中生物DNA分子会形成大量DNA多态性区域和非编码DNA序列。

不会造成生物种属归类争议

也不会造成任何形态上或酶系统表达的改变

通过生化鉴定方法无法对这类变化进行有效的分析;如常用于真菌种类鉴定的ITS基因

ITS片段能保持相对稳定的变异频率

亲缘关系非常接近的2个种都能在ITS序列上表现出差异，显示最近的进化特征;;;;;;1.形态学鉴定

;API试剂条——菌鉴定国际金标准;半自动细菌鉴定仪〔ATBExpression〕;原理：鉴定试条包含风干底物的反响孔，经标准浊度的菌液活化，于指定温度培养4小时/24小时后即可。计算机根据阅读器检测到的结果自动调用相应试剂条数据库，得出生化/同化结果和药敏试验结果。系统将所得编码跟数据库的典型菌株生化谱比较，以客观的2个参数〔鉴定百分率及T-值〕计算鉴定结果

特点：

速度快捷ATBExpression提供自动化接种，阅读及分析试条结果。

准确可靠的结果ID32及快速ID32试条由金牌标准API试条改进而成，配合自动化概念，结合成完整的细菌鉴定系统;全自动细菌鉴定仪〔VITEK2〕;原理：仪器的原理其实就是我们进行细菌鉴定中使用的生化反响。仪器把30个对细菌鉴定必需的生化反响培养基固定???卡片上，然后通过培养后仪器对显色反响进行判断，利用数值法进行判定。

特点：

快速：鉴定结果平均只需4-6小时。对与快速生长细菌(大肠埃希氏、粪肠球菌、变形杆菌、克雷伯氏菌等)鉴定可提前到2小时。

操作简便：全部操作自动化，简单而方便

资料处理：bioLIAISON软件集中管理实验室资料

获得AOAC国际认证：保证提供的微生物鉴定结果是公认的;全自动荧光免疫分析仪(mini-VIDAS);荧光定量PCR;;;;红外傅立叶光谱分析;色谱分析;;各种鉴定方法的比较;;;;;;;;微生物检测实验室应首先确保实验室的设施和环境不会对检验过程带来微生物污染

只有排除检测过程中的微生物污染，才能保证检验结果的准确性，才能有足够的理由相信，样品污染来自药品本身，而不在检验过程中被污染的

对检测机构而言，自身检测环境的控制要比样品检测更加重要;公正

准确

科学

高效;

加强检测的“过程控制〞

建立实验室环境微生物信息库、动态监控环境微生物的变化、建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。

如果样品检验过程中不合格，别离鉴定样品中的微生物，与环境微生物数据库比较、分析微生物污染来源，出具客观的检测报告，杜绝实验结果假阳性和假阴性的发生;样品接收;样品分发;环境

设施

仪器;样品分发;样品分发;样品分发;样品分发;

建立环境微生物菌株信息库

实验室洁净环境微生物监控

;头状葡萄球菌〔Staphylococcus?capitis〕

溶血葡萄球菌〔Staphylococcus?haemolyticus〕

缓症链球菌〔Streptococcus?mitis〕

科氏葡萄球菌〔Staphylococcus?cohnii〕

藤黄微球菌〔Micrococcus?luteus〕;实验室洁净环境微生物监控;在实验环境中以葡萄球菌属〔Staphylococcus〕别离数目最多为34%

微球菌属〔Micrococcus〕和芽孢杆菌属〔Bacillus〕次之，分别为19.15%和17.04%

假单胞菌属〔Micrococcus〕、莫拉菌群〔Moraxella〕、短波单胞菌属〔Brevundimonas〕占4.26%

短杆菌属〔Brevibacterium〕、不动杆菌属〔Acinetobacter〕、鞘氨醇单胞菌属〔Sphingomonas〕、泛菌属〔Pantoea〕等所占比例归于其他项中

收集的环境微生物中酵母菌占8.51%，主要为近平滑假丝酵母〔Candidaparapsilosis〕和粘红