肿瘤药理实验方法.ppt

将培养至快要融合的单层细胞(对数生长期)用0.25%的胰蛋白酶消化脱壁以后，经用PBS或生理盐水以1000r/min经l0min离心洗涤2次后，洗掉细胞中胰蛋白酶和培养液中血清等成分，用台盼篮染色法计数活细胞数，用生理盐水将肿瘤细胞稀释成1×l06-1×l07/ml，每个接种点皮下注射0.2ml细胞。细胞悬液可置于冰上。培养细胞动物体内移植法实体瘤动物体内移植模型的接种方法第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日移植性动物肿瘤模型实体瘤动物体内移植模型的建立小块瘤体接种法肿瘤细胞悬液接种法培养细胞动物体内移植法●瘤体测量方法●接种方法●主要特点第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日实体瘤动物体内移植模型实体瘤瘤体测量方法测量实体瘤生长的方法有多种，主要包括测定肿瘤的质量、体积或直径等。第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日瘤体测量方法通常于停药之后次日处死动物，立即剥离取出瘤块，剔除其他组织后称重。若对照组小鼠肿瘤平均小于1g或20%小鼠的瘤重小于400mg，表示肿瘤生长不良。在治疗期间给药组小鼠死亡率大于20%或平均体重下降(自身对照)超过15%者，表示药物毒性反应，应适当减量重复试验。比较试验组与对照组瘤重的差异，按下列公式计算肿瘤抑制率。肿瘤抑制率＝×100%称量肿瘤的质量当中药组的瘤重抑制率大于30%，需重复试验，连续数次疗效稳定，并经统计学处理有显著性差异时，则评定此药有一定疗效。第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日瘤体的直径与肿瘤的大小及质量成正比。测量瘤体的直径不需要处死动物，可用来动态观察瘤体的变化。方法：用游标千分卡尺测量肿瘤的相互垂直的直径，取它们的平均值即为平均直径。MD＝×100%MD为肿瘤平均直径；A、B、C为实体肿瘤3个相互垂直的直径，一般用毫米为单位。由于测量的厚度包括皮肤在内，故瘤体越小，产生的误差也就越大。注意由同一实验者测量。瘤体测量方法测量肿瘤的直径第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日动物肿瘤体内实验方法移植性动物肿瘤模型●人体肿瘤动物体内移植模型的建立●实体瘤动物体内移植模型的建立●非实体瘤动物体内移植模型的建立第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日非实体瘤动物模型的建立小鼠：6－7周龄，体重18－22g，组间平均体重相差不宜超过1g，健康，纯种、杂种或杂交第一代，同一种性别，一般用雌性动物接种。接种方法：取出小鼠接种第5－7d的腹水，用生理盐水将细胞浓度稀释为1×l06-1×l07/ml，每只小鼠腹腔注射0.2ml细胞悬液即可。腹水瘤传代：腹水瘤的传代方法与移植接种方法一样，需注意的是动物的年龄与体重对腹水会产生影响，也是导致数据离散的主要原因。腹水瘤移植接种方法第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日给药方法：常用皮下注射、腹壁皮下注射或灌胃。不宜腹腔注射。给药方案：一般每天给药l次，疗程7－10d，亦可每天给药数次，或间歇给药。给药剂量：如有LD50资料可供参考时，一般每日可用1/3－1/5LD50的剂量。动物数：实验组一般为6－10只，对照组数目可根据试验组多少决定，亦可参考下列公式。对照组鼠数＝实验组鼠数×操作时间：接种操作时间应尽可能短，不应超过半小时。炎热季节应注意降温，可在瘤源周围置以冰块。其它：严格无菌操作，瘤源污染常导致整批实验失败。实验记录应尽可能详细。可参考1978年全国抗癌研究协会制定的抗肿瘤药物体内筛选规程。腹水瘤移植实验注意事项第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日腹水瘤的测量方法是对小鼠进行每天1次的体重称量，一般在疗程结束后次日称体重，逐日记录。然后进行自身对照或用空白对照，观察比较体重变化。非实体瘤动物模型的建立腹水瘤测量方法对照组通常在2－3周内死亡，若治疗期间对照组动物死亡≥20%或其20%存活时间长于4周以上，实验均应作废。治疗组观察时间一般为50d左右，按下列公式计算生命延长率：生命延长率＝×