蛋白免疫快速诊断应用技术.ppt

三、快速免疫层析技术的应用介绍如何去开发一个胶体金层析产品——以尿妊娠试纸（HCG)为例第30页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)的反应原理图双抗体夹心法第31页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备1、生物材料的准备：配对的单克隆抗体（特异性针对HCG-α,β亚基)二抗2、主要生产材料硝酸纤维素膜（特定孔径、流速）样品垫结合垫吸收垫（吸水纸）、片材（PVC衬板）等第32页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)的研发准备3、主要设备点膜仪喷金仪干燥设备粘帖装置切刀第33页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制1、特异性的单克隆抗体亲和力特异性稳定性第34页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制2、标记物与蛋白偶联颗粒大小颗粒的均一性颗粒的形状标记物与蛋白的最佳比例标记影响影响因素考虑第35页，共51页，星期日，2025年，2月5日三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制蛋白与胶体金的偶联：最佳pH测定：取若干1.5ml的试管，分别加入1ml胶体金用K2CO3将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10；加入过量待标记蛋白；取96孔培养板，按pH从高到低分别将上述胶体金分别取100μl加入孔中，重复三次；每孔分别加入20μl浓度为10%的NaCl溶液，混合，室温下放置10min；观察胶体金颜色变化，记录保持红色的最低pH第36页，共51页，星期日，2025年，2月5日关于蛋白免疫快速诊断应用技术第1页，共51页，星期日，2025年，2月5日交流提纲前言一）、免疫检测基础知识及免疫检测技术的进展综述二）、快速免疫检测技术现状和前景展望三）、快速免疫检测技术的应用介绍四）、思考——胸怀大志，放眼世界，立志细节第2页，共51页，星期日，2025年，2月5日前言：1、个人所从事的行业和专业的限制1）医学专业、生物专业、化学专业（人）2）临床免疫类检验试剂（人用）的开发3）对客户/临床需求有所了解2、有可能找到的共同点1）所采用技术方法具有共同点2）为了共同的目标——为人类健康服务第3页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测基础知识及免疫检测技术的进展综述免疫学技术的范畴1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定第4页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测基础知识及免疫检测技术的进展综述免疫学技术的应用特点1、对象——“包罗万象”2、方法——“兼容并蓄”第5页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测技术的进展综述抗原的概念与属性1、免疫原性——可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）2、免疫反应性——选择结合性（和免疫应答产物特异性结合的特性）第6页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测技术的进展综述抗原抗体反应的特点1、特异性2、可逆性3、适合比例性第7页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测技术的进展综述免疫学检测技术评价标准1、Specificity（特异）2、Sensitivity（敏感）3、Simplicity（简便）4、Safety（安全）5、Saving（节约）第8页，共51页，星期日，2025年，2月5日一、免疫检测技术的进展综述免疫检测技术的进展1、经典的免疫分析技术凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实现自动化。2、现代的免疫分析技术荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系（稀土）元素免疫标记、胶体颗粒标记、临床化学免疫分析技术、发光免疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。第9页，共51页，星期日，2025年，2月5日二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCT概念的引入POCT——PointofCareTesting不需要固定的场地、不需要太多的时间、也不需要特定的地方、在没有实验室设备的条件下也能完成检测。检测可在患