食品安全肠杆菌科检验.pptx

中华人民共和国国家标准

GB4789.41—2016

食品安全国家标准

食品微生物学检验肠杆菌科检验

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

2016-08-31发布

2017-03-01实施

发布

1范围

本标准规定了食品中肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的检验方法。

本标准第一法适用于肠杆菌科含量较高的食品中肠杆菌科的计数;第二法适用于肠杆菌科含量较低食品中肠杆菌科的计数。

2术语和定义

2.1

肠杆菌科Enterobacteriaceae

在给定条件下发酵葡萄糖产酸、氧化酶阴性的需氧或兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.2

肠杆菌科计数EnumerationofEnterobacteriaceae

按本标准规定方法,对每克或每毫升检样中的肠杆菌科进行计数。

2.3

最可能数mostprobablenumber;MPN

基于泊松分布的一种间接计数方法。

3设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

3.1恒温培养箱:36℃±1℃。

3.2冰箱:2℃~5℃。

3.3水浴箱:46℃±1℃。

3.4天平:感量0.1g。

3.5显微镜:10倍~100倍。

3.6均质器。

3.7振荡器。

3.8无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

3.9无菌锥形瓶或等效容器:容量150mL、500mL。

3.10无菌培养皿:直径90mm。

3.11无菌试管:18mm×180mm、15mm×150mm。

3.12pH计或pH比色管或精密pH试纸。

4培养基和试剂

4.1缓冲蛋白胨水(BPW):见B.1。

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食品微生物学检验肠杆菌科检验

GB4789.41—2016

1

4.2缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤(EE肉汤):见B.2。

4.3结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA):见B.3。

4.4营养琼脂(NA):见B.4。

4.5葡萄糖琼脂:见B.5。

4.6革兰氏染色液:见B.6。

4.7氧化酶试剂:见B.7。

4.8无菌1mol/LNaOH:见B.8。

4.9无菌1mol/LHCl:见B.9。

肠杆菌科平板计数法检验程序见图1。

图1肠杆菌科平板计数法检验程序

第一法肠杆菌科平板计数法

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5检验程序

2

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6操作步骤

6.1样品的稀释

6.1.1固体和半固体样品:称取25g样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

6.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品放入盛有225mLBPW的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入盛有9mLBPW的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不应触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液。

6.1.4按6.1.3操作程序,依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。

6.2倾注平板和培养

6.2.1根据对样品污染状况的估计及相关限量要求,选择2个~3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种2个无菌平皿。同时,分别吸取1mLBPW加入两个无菌平皿内作为空白对照。

6.2.2将10mL~15mL冷却至46℃的VRBGA(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,使