柑橘类水果中橘红2号的测定++液相色谱串联质谱法FDIS.docx

B30

唐

DB1302

山市地方标准

DB1302/T471—2017

柑橘类水果中橘红2号的测定液相色谱串联质谱法

2017-12-20发布2018-01-01实施

唐山市质量技术监督局发布

DB1302/T471—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由唐山市质量技术监督局提出。

本标准由唐山市农牧局归口。

本标准起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。

本标准起草人：周鑫、张立田、段晓然、项爱丽、汤思凝、蒙君丽、张建雄、阴明杰、庞学良。

DB1302/T471—2017

柑橘类水果中橘红2号的测定液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了液相色谱串联质谱法测定鲜柑橘类水果中橘红2号。本标准适用于鲜柑橘类水果中橘红2号残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单或修订版）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

3原理

试样经乙腈提取，NH2固相萃取柱净化，浓缩定容后经液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1甲醇：色谱纯。

4.1.2乙腈：色谱纯。

4.1.3甲酸：色谱纯。

4.1.4乙酸乙酯：色谱纯。

4.1.5氯化钠。

4.2试剂配制

4.2.1乙酸乙酯甲醇溶液：（乙酸乙酯:甲醇=9:1，V:V）

4.2.270%乙腈溶液：（乙腈:水=7:3，V:V）

4.3标准品

橘红2号标准品（CitrusRed2，CAS：6358-53-8），纯度≥99%。

4.4标准溶液配制

4.4.1橘红2号标准储备液：称取橘红2号标准品约10mg，精确至0.01mg，置于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配置成1mg/mL浓度的储备液，-18℃保存。

4.4.2橘红2号标准中间液：用甲醇稀释橘红2号标准储备液至10μg/mL。

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4.4.3橘红2号标准工作液：用甲醇稀释橘红2号标准中间液至100ng/mL。

4.5材料

4.5.1NH2固相萃取柱（500mg，6mL）或相当者。

4.5.2滤膜：0.22μm。

5仪器和设备

5.1液相色谱-质谱/质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2分析天平：感量为0.00001g和0.01g。

5.3离心机：转速不低于6000r/min。

5.4固相萃取装置。

5.5旋转蒸发仪。

5.6涡旋混合器。

5.7组织捣碎机。

5.8具塞塑料离心管：50mL。

6试样制备

取适量新鲜的样品，去叶、梗后均质处理，-18℃冷冻保存，备用。

7分析步骤

7.1提取

准确称取4g（精确至0.01g）试样，置于50mL聚丙烯具塞离心管中，加入20mL乙腈，涡旋振荡1min，加入4g氯化钠，再涡旋30s，于6000r/min离心10min。准确吸取10.00mL乙腈层于鸡心瓶中，40℃旋转蒸发至近干，加入乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)5mL，充分混合溶解。

7.2净化

用5mL甲醇活化NH2固相萃取柱，将提取液(7.1)过柱，用乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)淋洗固相萃取柱两次，每次5mL，抽干，收集全部流出液，于40℃旋转蒸发至干，1.00mL70%乙腈（4.2.2）定容，涡旋溶解，过0.22μm滤膜，待上机。

7.3基质标准溶液的制备

取阴性柑橘样品按照7.1、7.2的操作步骤进行，用最终所得的定容液配制基质标准溶液。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

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a)色谱柱：ShimadzuODS-ⅢC18，100mm×2.1mm，1.6μm，或者相当；

b)柱温：40℃;

c)进样量：5μL；

d)流动相：A，0.1%甲酸水溶液；B，乙腈；

e)流动相条件：流速0.3mL/min，洗脱程序见表1。

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间(min)

0.0

0.8

2.0

2.5

2.6

2.8

0.1%甲酸水溶液（%）

30

30

0

0

30

30

乙腈（%）

70

70

100

100

70

70

7.4.2质谱参考条件

a)离子源：