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转染体系的关键组分对细胞转染试验的效率有何影响。

转染体系的关键组分对细胞转染试验的效率有何影响。

【组织培育试剂】

【组织培育试剂】

一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用颖配制的培育基和添加剂，并经可能削减所用试剂的变更。

一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用颖配制的培育基和添加

剂，并经可能削减所用试剂的变更。

根底培育基—目前所使用的各种市售培育基〔

根底培育基—目前所使用的各种市售培育基〔如，RPMI1640和

DMEM〕。培育基的成分包括养分物质〔氨基酸，葡萄糖〕，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分格外不稳定，因此假设不在使用时颖参加就可能会产生问题。务必要使培育基避光保存。由于有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞

毒性物质。

酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培育基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍旧是一个问题。

胎牛血清—血清是一种含有白蛋白、球蛋白、生长促进因子和生长抑制因子的极为简单的混和物。采集血清所用动物的年龄、养分水平、和安康状况可影响到血清中这些成分的数量和质量。因此血清易受显

著生物学变异的影响。

著生物学变异的影响。

添加剂—某些细胞的生长依靠于一些对生命力或细胞分裂必不行少

添加剂—某些细胞的生长依靠于一些对生命力或细胞分裂必不行少

的物质〔如，生长因子，微量元素，必需代谢物和蛋白等

的物质〔如，生长因子，微量元素，必需代谢物和蛋白等〕。

CO2

CO2培育箱—细胞生长所需环境为37℃、相对湿度为95％的CO2

培育箱。用CO2是为了掌握pH值。细胞生理对pH的变化格外敏感，因此多数细胞培育基都含有碳酸氢盐缓冲体系。有些培育基需要CO2浓度为5％来有效掌握pH值，而另一些则需要10％的CO2。需要向您的培育基供给者核对一下适当的CO2浓度。假设培育箱内培育条件与所需条件不全都〔温度、湿度和CO2〕则会导致试验结

果的板间变异性。来自于培育箱内的污染物、化学物质，或真菌／细

胞的污染也都可能影响到细胞生理

【细胞】

一般提示：亲热观看您的细胞；确保它们状态良好。在开头转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开头到完毕都保持最正确状态。

增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结

增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结

果的全都性和质量的最重要的变量。为帮助解决这些问题，罗氏应用科学部与ATCC?〔美国菌种保藏中心〕进展了合作。为保证将被转染细胞的质量，罗氏应用科学部建议使用近从

果的全都性和质量的最重要的变量。为帮助解决这些问题，罗氏应用

科学部与ATCC?〔美国菌种保藏中心〕进展了合作。

为保证将被转染细胞的质量，罗氏应用科学部建议使用近从

ATCC?获得的细胞系。

分裂细胞相比较非分裂细胞—分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当

天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进展转染时不应处于生长过度的状态。由于FuGENE?6和HD转染试剂对于细胞作用温顺，可同时进展贴壁细胞的种板和转染。

此外，还常用促有丝分裂刺激物〔如，病毒转化，生长因子，条件培

养基，以及滋养细胞〕来活化原代培育细胞。

贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。天生趋于悬浮的细胞〔如HL60，Jurkat〕格外难以转染。相反，天生为贴壁的细胞〔如HEK，CHO〕则可适应悬浮生长的条件。

这两种细胞〔即那些自然悬浮的和那些适应悬浮的细胞

这两种细胞〔即那些自然悬浮的和那些适应悬浮的细胞〕的浆膜是不

一样的。据推想转染过程中的一个限制步骤就是通过内吞作用摄取转染分子〔DN

一样的。据推想转染过程中的一个限制步骤就是通过内吞作用摄取转

染分子〔DNA或RNA与转染试剂的复合物〕；然而，目前对此尚未

有分子水平上的合理机制的解释。细胞间膜构造的差异可能是某些细

胞类型天生难以转染的局部缘由。所以，查找更有效转染试剂的工作

目前还主要是阅历性的，尤其对于那些天生为悬浮的细胞而言更是如此。

这常常是在不含血清而含有抑制转染的特别添加剂的培育基中发生。经留神处理后，这些细胞可适应于在没有添加剂的环境中悬浮生长。

假设这些适应于悬浮生长的贴壁细胞在没有这些添加剂的环境中生长，那么它们就可以被转染。

分批方案—在对培育细胞进展分批传代培育之前，必需把贴壁细胞用胰蛋白酶消化使之脱离培育基质。这个常规操作可导致正常细胞功能受到严峻损害。因此分批方案的不同〔如，胰蛋白酶消化时间的延长，胰蛋白酶的失