一种靶向基因载体及其制备方法和应用ZL.201610339273.8.docx

1.一种靶向基因载体及其制备方法和应用

申请号

CN201610339273

申请日

2016.05.20

公开（公告）日

2016.10.26;2019.08.23

ipc分类号

C12N15/88

申请（专利权）人

中国科学院深圳先进技术研究院

发明人

赵晓丽;郑楚萍

摘要

-ABSTRACT:本发明提供了一种骨靶向基因载体，所述骨靶向基因载体为阿仑膦酸钠改性的脂质体，所述阿仑膦酸钠改性的脂质体包括阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇以及阿仑膦酸钠改性的磷脂，所述阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇构成磷脂层，所述阿仑膦酸钠改性的磷脂穿插于所述磷脂层中并与所述磷脂层形成囊泡结构，所述阿仑膦酸钠暴露在所述磷脂层之外。

该骨靶向基因载体对骨组织有较高的靶向性和转染效率，可以负载基因物质在骨组织附近高效表达。本发明还提供了该骨靶向基因载体的制备方法及应用。

权利要求

1.一种骨靶向基因载体，其特征在于，所述骨靶向基因载体为阿仑膦酸钠改性的脂质体，所述阿仑膦酸钠改性的脂质体包括阳离子类脂、中性辅助类

脂、胆固醇以及阿仑膦酸钠改性的磷脂，所述阳离子类脂、中性辅助类脂、

胆固醇构成磷脂层，所述阿仑膦酸钠改性的磷脂穿插于所述磷脂层中并与所述磷脂层形成囊泡结构，所述阿仑膦酸钠暴露在所述磷脂层之外，所述阿仑膦酸钠改性的磷脂包括聚乙二醇衍生化磷脂和通过酰胺键与聚乙二醇衍生化磷脂连接的阿仑膦酸钠；所述阿仑膦酸钠改性的磷脂与所述阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇的摩尔比为(0.01-0.07)：(1-3)：(0.5-1)：(0.1-1)；

所述阳离子类脂选自(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵、(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵和双十八烷基二甲基溴化胺中的一种或多种；所述中性辅助类脂选自二油酰磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰胆碱中的一种或两种；所述聚乙二醇衍生化磷脂是由聚乙二醇通过共价键和磷脂类物质相连得到，所述聚乙二醇分子的分子量为200～20000道尔顿。

2.如权利要求1所述的骨靶向基因载体，其特征在于，所述骨靶向基因载体的粒径为40-200nm。

3.一种骨靶向基因载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将聚乙二醇衍生化磷脂溶于第一溶剂，并加入催化剂、脱水剂活化，再加

入溶解在第一溶剂中的阿仑膦酸钠，在室温下进行酰胺化反应8-12h，得到反应液，将所述反应液经分离纯化后进行冷冻干燥，得到阿仑膦酸钠改性的磷脂，其中，所述聚乙二醇衍生化磷脂的羧基与阿仑膦酸钠的氨基的摩尔比为(1-10):1；

(2)取上述阿仑膦酸钠改性的磷脂，与阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇加入到反应器中，加入有机溶剂，混合均匀后得到第一混合溶液，通过旋转蒸发法去除所述第一混合溶液中的溶剂，干燥得到膜状材料；其中，所述阿仑膦酸钠改性的磷脂与所述阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇的摩尔比为

(0.01-0.07)：(1-3)：(0.5-1)：(0.1-1)；

(3)加入磷酸盐缓冲溶液溶解所述膜状材料，并进行超声处理，得到第二混合溶液，将所述第二混合溶液采用微孔过滤膜来回挤压过滤多次，得到骨靶向基因载体，其中，所述骨靶向基因载体为阿仑膦酸钠改性的脂质体，所述阿仑膦酸钠改性的脂质体包括阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇以及阿仑膦酸钠改性的磷脂，所述阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇构成磷脂层，所述阿仑膦酸钠改性的磷脂穿插于所述磷脂层中并与所述磷脂层形成囊泡结

构，所述阿仑膦酸钠暴露在所述磷脂层之外。

4.一种基因递送系统，其特征在于，所述基因递送系统为基因物质和权利要求1所述的骨靶向基因载体通过静电作用形成的纳米微球，其中，所述骨靶向基因载体与所述基因物质的氮磷摩尔比为(2-12)：1。

5.一种基因递送系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将基因物质和如权利要求1所述的骨靶向基因载体溶解于灭菌水后，得到混合液，然后室温静置，所述混合液中的骨靶向基因载体和所述基因物质通过静电作用形成纳米微球，得到所述基因递送系统，其中，所述骨靶向基因载体与所述基因物质的氮磷比为(2-12)：1。

6.如权利要求1或2所述的骨靶向基因载体或如权利要求5所述的基因递送系统在制备基因治疗药物中的应用。

说明书

一种靶向基因载体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及非病毒基因传递系统领域，具体涉及一种骨靶向基因载体及其制备方法和应用。

背景技术

基因治疗是一种通过基因载体将目标基因传递到靶细胞内，通过添加、阻

断、纠正基因等方法实现治疗疾病的目的。基因治疗为一些重大疾病提供了一种很有发展前途的治疗方法。然而，高效、靶向性的基因载体的匮乏，制约着基因治疗在临床上的广泛应用。无疑成为基因治疗成