微生物基本操作规范.pptxVIP

食品微生物检验

规范操作基础培训

1清洗、消毒和灭菌操作

福建出入境检验检疫局技术中心食品所微生物实验室

2010.05

22培养基的制备55制片、染色及显微观察33采样和取、制样66实验室安全基础知识11清洗、消毒和灭菌操作44接种、分离纯化主要内容：

1清洗、消毒和灭菌操作1.1玻璃器皿的清洗新购的玻璃器皿碱性玻璃浸泡于１mol/L盐酸浸泡过夜，中和玻璃中的碱性物质。用过的玻璃器皿污染的器皿，必须经过适当消毒，污迹不能洗净时，可浸泡于洗液内。洗液的配制称取重铬酸钾100g与1000mL水置大烧瓶中加热搅拌溶化，待冷却后，将烧瓶置冷水中，慢慢加入浓流酸250mL，并不断搅拌。

消毒（disinfection）：杀灭物体上病原微生物的方法，但不一定杀死细菌芽胞。防腐（antisepsis）：防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。灭菌（sterilization）：杀灭物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法。无菌（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物进入机体或物体的操作方法，称为无菌操作或无菌技术。进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。1.2消毒、灭菌

消毒灭菌的方法LOGO物理消毒灭菌法化学消毒法

（一）物理消毒灭菌法热力灭菌法热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类。在同一温度下，后者效力比前者为大，这是因为：湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度。

加热灭菌和加热消毒的方法干热灭菌法火焰灭菌法干燥加热空气灭菌法高温灭菌巴氏消毒法常压下煮沸消毒法湿热灭菌法间歇灭菌法常规加压灭菌法加压下(高压蒸汽灭菌法)连续加压灭菌法

干热灭菌法焚烧：是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废弃物品或尸体等。烧灼：直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌。干烤：鼓风干燥箱灭菌。一般加热至160℃～170℃经2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器等。

煮沸法：1个大气压下，煮沸的水温为100℃，一般细菌繁殖体煮沸5～10分钟即被杀死。细菌芽胞常需煮沸1～２小时，才被杀死。水中加入2%碳酸钠，可提高沸点达105℃，促进细菌芽胞的杀灭。巴氏消毒法（pasteurization）:用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法。加热61.1～62.8℃半小时即可，常用于牛奶和酒类等的消毒。12湿热灭菌法

间歇灭菌法（郭霍氏蒸汽消毒）:将待灭菌的物品100℃加热15～30分钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。针对有点培养基和牛奶、糖等在100℃以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌。01高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为103.4kPa，温度达121℃,维持15～30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。02

在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空气已经排空，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。定期对灭菌效果进行监测和验证，可采用：物理监测法（留点温度计法、热电偶法）；化学指示剂法（化学指示胶带、指示卡等）；生物指示法（孢子悬液、孢子条带等）监控高压灭菌的效果。

利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广。紫外线：紫外线波长为200～300nm时具有杀菌作用，其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA，使同一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变DNA的分子构型，干扰细菌DNA的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒。应用β射线作食品表面杀菌，γ射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。2.辐射

采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器。通过过滤，只让液体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体留在筛子上面，从而达到除菌的目的。这种灭菌方法适用于一些对