DB41∕T 1614-2018 单孢杂交平菇品种选育技术规程.docxVIP

ICS65.020.20B05

DB41

河南省地方标准DB41/T1614—2018

单孢杂交平菇品种选育技术规程

2018-06-19发布2018-09-19实施

河南省质量技术监督局发布

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DB41/T1614—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所。

本标准主要起草人：孔维丽、康源春、张玉亭、袁瑞奇、孔维威、胡素娟、刘芹。本标准参加起草人：韩玉娥、段亚魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟庆涛。

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DB41/T1614—2018

平菇单孢杂交品种选育技术规程

1范围

本标准规定了单孢杂交平菇品种选育技术的术语和定义、亲本选择、单核菌丝的制备、单孢杂交、新菌株筛选、鉴定和保藏。

本标准适用于平菇单孢杂交新品种的选育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T1003—2008普通用途双向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜

GB/T4456—2008包装用聚乙烯吹塑薄膜

GB5749—2006生活饮用水卫生标准GB/T12728—2006食用菌术语

GB/T21125—2007食用菌品种选育技术规程NY/T119—1989饲料用小麦麸

NY/T528—2010食用菌菌种生产技术规程

NY/T1844—2010农作物品种审定规范食用菌

NY5099—2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求

NY5358—2007无公害食品食用菌产地环境条件

JC/T479—2013建筑生石灰

DB41/T1211—2016平菇发酵料栽培技术规程DB41/T1186—2015平菇熟料栽培技术规程

农业部第62号令《食用菌菌种管理办法》2006年

3术语和定义

GB/T12728—2006和GB/T21125—2007界定的术语和定义适用于本文件。3.1

担孢子

经核配和减数分裂后在外生于担子上形成的孢子。3.2

单孢子分离法

通过分离单个孢子以获得真菌纯培养物的方法。3.3

菌株

由单一细胞个体通过无性繁殖形成的纯培养物及其后代。3.4

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DB41/T1614—2018

品种

人工选育或发现并改良，具备特异性、一致性、稳定性，具有符合《农业植物品种命名规定》的品种名称。

3.5

对照品种

目前生产上常用的主栽品种。

4亲本选择

选择生物学性状优势互补、亲缘关系较远、生态差异大、特异性差异显著的菌株为亲本。

5单核菌丝的制备

5.1孢子收集

挑选第一茬菇颜色均匀、菇型完整，能够代表亲本菌株生物学特性的8成熟整朵子实体为种菇，选取其中1～2片菌盖为种菇，放置在干燥洁净与孢子颜色有差异的纸张上，折叠存放，保持环境温度24℃~26℃,湿度55%～65%，放置12h～18h，即可得到孢子印。

5.2单孢分离

5.2.1一步稀释法

无菌针挑取0.1mm×0.1mm孢子印于灭菌后的400mL无菌水内，混合均匀，吸取1mL孢子混合液移入PDA培养基内，旋转培养皿，使悬浮液铺满培养基表面。

5.2.2梯度稀释法

250mL三角瓶加入100mL纯净水灭菌备用，无菌接入一环平菇孢子，摇匀。选用4～5支20ml试管灭菌备用，每支试管内加入9mL无菌水，吸取1mL孢子悬浮液加入1号试管内摇匀，吸取1mL1号试管内孢子悬浮液加入2号试管内，稀释至10-4～10-6，显微镜镜检，以视野内保留4～5个孢子为宜，吸取1mL孢子悬液移入PDA培养皿内，旋转培养皿，使悬浮液铺满整个皿内培养基表面。

5.3单孢鉴定

5.3.1插片培养

将接有孢子悬浮液的培养皿，放置于25℃培养箱培养5d～6d，肉眼能见孢子萌发，取灭菌后的0.5μL～10μL移液枪枪头，垂直对准萌发的孢子，扎取，携带培养基转入新的PDA培养皿内，25℃培养7d。萌发后的菌丝再转接至新的培养皿内，距接种点0.5cm处，插入无菌盖玻片，25℃培养，以30～40个培养皿为宜。

5.3.2显微镜检

取洁净载玻片滴入0.5mL去离子水或棉蓝染色液，取出长至盖玻片1