动物细胞工程第2课时课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第二节动物细胞工程

动物细胞融合技术与单克隆抗体;

本节主要解决的困惑

1.动物细胞融合技术

★2.设计单克隆抗体制备的实验方案;

比较项目;

灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面

病毒表面糖蛋白和细胞膜上的糖蛋白发生作用

蛋白质、脂质分子重排，细胞膜打开

细胞融合，形成杂交细胞;

1、下列关于动物细胞融合的说法，错误的是(D)

A.细胞融合前要用酶解法将组织分散成单个细胞

B.细胞融合的原理是细胞膜的流动性;

2.(2018江苏单科，22,3分)如图为细胞融合的示意图，下列叙述

正确的是(不定项)(BC)

A.若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去分化再诱导融合O)a

B.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现

C.c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关

D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因;

1.阅读以下资料，设计制备治疗新冠的单克隆抗体实验方案，可用简单文字和箭头表示，完成后拍照上传，小组长上传即可。

2.请先独立思考，然后小组合作交流，派代表展示成果，时间4min。

资料：人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多

达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。

骨髓瘤细胞能无限增殖。;

获得产生抗新冠病毒抗体的B淋巴细胞

(一筛):利用选择培养基获得

杂交瘤细胞

腹腔中有易于培养杂交瘤细胞的

条件;

未融合B-B融B-骨髓瘤骨髓瘤-骨髓未融合的骨

的B细胞合细胞融合细胞瘤融合细胞髓瘤细胞

用HAT选择培养基将其他类型细胞淘汰，只保留

进行第一次筛选B细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞

多孔板进行第二次筛选;

第一次筛选的内容如下。

①诱导融合后，融合体系中有多种细胞：B细胞-B细胞形成的融合细胞、〈B细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞一骨髓瘤细胞形成的融合细胞。另外，还会有更多类型的三细胞融合细胞甚至四细胞融合细胞，这些细胞大多不稳定，很快会死掉。当然??还有未融合的B细胞和骨髓瘤细胞。

②我们需要的只是B细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，此时可以通过HAT选择培养基进行筛选。DNA合成时所需的脱氧核苷酸有两种来源：从头合成途径和补救途径。从头合成途径又称D途径，D是de～novo的缩写，指的是细胞利用甘氨酸、甲酸、谷氨酰酸、天冬氨酸等合成嘌呤以及利用谷氨酰胺、CO?、天冬氨酸合成嘧啶。而补救途径又称S途径，S是salvage的缩写，即细胞利用外源的或分解代谢产生的碱基和核苷重新合成核苷一磷酸，再形成核苷二磷酸、核苷三磷酸的过程。在设计实验的时候就考虑到了筛选的稳态，选用的骨髓瘤细胞是一种代谢缺陷型的株系：只有D途径，没有S途径。

③HAT培养基中的H表示次黄嘌呤，A表示氨基蝶呤(aminopterin),T表示胸腺嘧啶脱氧核苷，即在正常动物细胞培养基中添加有这三种物质，其中氨基蝶呤可以通过抑制D途径抑制DNA的合成，抑制细胞分裂，是常用的抑癌药物，对应的药物称为癌得宁。而次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷是S途径所需要的。;

1.细胞合成DNA通常有2条途径：第1条途径是利用糖和氨基酸合成核苷酸，

进而合成DNA;第2条途径是通过HGPRT利用核苷酸的前体合成核苷酸，进

而合成DNA,HAT培养基是基本培养基添加了次黄嘌呤(H)、甲氨蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T),A可以阻断DNA合成的第1条途径，H和T则是第2条途径中合成核苷酸的原料。HAT培养基可以用于单克隆抗体制备杂交瘤细胞的选择，小鼠骨髓瘤细胞是一类HGPRT代谢缺陷型细胞。说法正确的是()B

A.小鼠免疫B细胞和骨髓瘤细胞融合后，培养基上会有3种类型的细胞

B.HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡C.HAT培养基中未融合的免疫B细胞仍具有增殖能力而持续进行细胞分裂D.HAT培养基中选择出的杂交瘤细胞都能无限增殖和产生所需抗体;

能正常合成DNA,无法生长。下列叙述正确的是(C)免疫B细胞骨髓瘤细胞

HGPRT+HGPRT

细胞融合

A.骨髓瘤细胞和免疫B细胞可用仙台病毒诱导融合HAT培养波

B.骨髓瘤细胞在HAT筛选培养液中能正常增殖