DNA的粗提取与鉴定课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

一、基本思路

选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

三、材料用具

1.选材

DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花或猪肝等。;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

三、材料用具

2.试剂

①研磨液：SDS、EDTA、Tris、NaCl和HCl

SDS(十二烷基硫酸):破坏细胞膜，结合蛋白质，使其与DNA分离

EDTA(乙二胺四乙酸):抑制DNA(水解)酶的活性

Tris(三羟甲基氨基甲烷):维持PH稳定，防止DNA在PH变化时降解或变性

②体积分数为95%的酒精:析出DNA

③2mol/L的NaCl溶液:溶解DNA

④二苯胺试剂:鉴定DNA⑤蒸馏水;

称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨。

(1)研磨的目的：破碎细胞，使核物质溶解在研磨液中

充分研磨：研磨不充分，DNA分子不能从细胞核中释放出来，

从而影响提取的DNA含量。

(2)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶。

研磨效果好(有利于充分研磨);

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

四、方法步骤

2.过滤或离心取上清液

①在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。

②也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min,再取上清液放入烧杯中。

(1)过滤能用滤纸代替好不好?不好，DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。

(2)上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质?蛋白质、多糖等;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA

①在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置2-3min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；

②或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min,弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。

(1)酒精预冷的作用：

①使DNA易形成沉淀析出；②低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。

(2)搅拌时应轻缓、并沿一个方???：减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA。;

四、方法步骤探究·实践DNA的粗提取与鉴定

4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定

①取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。

②将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。

③向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。

④混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。

待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

五、结果分析与评价

1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗?用二苯胺试剂鉴定的结果如何?

观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能

的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。

2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗?

本实验粗提取的DNA可能仍然含有蛋白质、多糖等杂质。;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

五、结果分析与评价

3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，

分析产生差异的原因。

本实验可以采取分组的方式进行。可以选取不同的实验材料；也

可以查阅资料了解其他提取DNA的方法，对同种材料采用不同的方法。最后从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。;

探究·实践DNA的粗提取与鉴定

拓展探究：

1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞?

将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。

以血液(如鸡血细胞)为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。

2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉(木瓜蛋白酶),这样有什么好处?

利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA,有利于DNA与蛋白质分开。;

进一步纯化DNA——用高盐浓度的溶液溶解DNA,

能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；

用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA,就能够除