植物组织培养实验：菊花花瓣组织培养.ppt

实验三菊花花瓣组织培养（一）实验目的掌握菊花花瓣愈伤组织和不定芽的诱导，进一步熟练无菌操作过程。（二）实验原理菊花是异质六倍体，遗传背景复杂，杂交后代性状分离严重，并且自交不亲和性高，所以通过自交获得自交系可能性极小，通过杂交培育菊花新品种需要的时间也很长，因此，组培技术在菊花品种的改良等方面起着较为重要的作用。离体条件下，菊花花瓣能诱导出愈伤组织和不定芽，然后再分化成完整植株，变异频率较高，选育效率高，是选育菊花新品种的良好手段。（三）实验材料和用具实验材料：菊花花瓣实验药品：MS、1mg/mlNAA、1mg/ml2,4-D、1mg/ml6-BA、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精、2％次氯酸钠，吐温-80，无菌水。灭菌培养基：MS2：MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAAMS3：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAAMS4：MS+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAA实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤配制以下培养基各100ml：MS5：MS+1.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAAMS6：MS+1.0mg/L6-BA+3.0mg/L2,4-D取200ml烧杯2只，标记，各加入4gMS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。各加入1mg/ml6-BA100μl，并不断搅拌。分别加入1mg/mlNAA200μl和1mg/ml2,4-D300μl，并不断搅拌。用1mol/LHCl或NaOH调节pH至5.8～6.0。分装。将2种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。4.接种菊花花瓣，洗净，70％乙醇浸泡30s，2％次氯酸钠液（加1～2滴吐温-80）浸泡20min。进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手、盛放外植体的烧杯外壁和工作台面，点燃酒精灯。将次氯酸钠倒掉，加无菌水冲洗3～5次。剪成3mm小片，每瓶接种5片。每组每种培养基各4瓶。光照培养箱25℃、60％光照16h/d培养。作业1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种培养基的花瓣愈伤组织（不定芽）诱导率（形成愈伤组织（不定芽）的外植体数/总接种外植体数×100％）。