基因工程拔高题(教师版).pdfVIP

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基因工程拔高题

一、基因工程

(一)限制酶考点

限制酶的选择原则

玲源

()根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类资

①应选择切点位于目的基因两侧的限制酶,以便将目的基因切出,如图甲可选择PstI。

②不选择切点位于目的基因内部的限制酶,以防破坏目的基因,如图甲不能选择SmaI。

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也

可选择用PstI和EcoRI两种限制酶,但要确保质粒上也有这两种酶的切点,而且这种切点不至于破坏所有

的标记基因以及启动子和终止子。生

()根据质粒的特点确定限制酶的种类玲

①所选限制酶要与目的基因的限制酶相一致,以确保具有相同的黏性末端。

②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,应至少含有一个完好

的标记基因。如图乙中限制酶PstI因其会破坏标记基因而不宜选择。

③所选限制酶切点不应位于复制原点处,以防破坏复制原点。如果所选酶的切点不止一个,则切割重组后

可能会丢失某些片段,若丢失的片段含复制原点区,此切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

④所选限制酶,其切割位点应位于启动子与终止子之间。如图乙中HindⅢ会破坏启动子,EcoRI会破坏

终止子,而NdeI和BamHI切出的切口可让目的基因嵌入启动子和终止子之间。

玲源

(3)参考Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶。资

如果质粒上标出T-DNA片段,则所选限制酶切点应位于T-DNA片段中。从而有利于将目的基因嵌入到T-

DNA片段上,因为Ti质粒的T-DNA片段最容易转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体DNA上。如

用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的黏性末端不同)切割某DNA,获得含目的基因的片段。如果利用

该片段构建基因表达载体,则下图中甲、乙、丁,Ti质粒均不宜选择,而丙Ti质粒宜选取。(分析如下)

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