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基因工程拔高题

一、基因工程

（一）限制酶考点

限制酶的选择原则

源

资

部

内

物

生

姐

玲源

（）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类资

①应选择切点位于目的基因两侧的限制酶，以便将目的基因切出，如图甲可选择PstI。

部

②不选择切点位于目的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因，如图甲不能选择SmaI。

内

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也

物

可选择用PstI和EcoRI两种限制酶，但要确保质粒上也有这两种酶的切点，而且这种切点不至于破坏所有

的标记基因以及启动子和终止子。生

姐

（）根据质粒的特点确定限制酶的种类玲

源

资

①所选限制酶要与目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。

部

②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，应至少含有一个完好

的标记基因。如图乙中限制酶PstI因其会破坏标记基因而不宜选择。

内

③所选限制酶切点不应位于复制原点处，以防破坏复制原点。如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后

物

可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制原点区，此切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

生

④所选限制酶，其切割位点应位于启动子与终止子之间。如图乙中HindⅢ会破坏启动子，EcoRI会破坏

姐

终止子，而NdeI和BamHI切出的切口可让目的基因嵌入启动子和终止子之间。

玲源

（3）参考Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶。资

如果质粒上标出T-DNA片段，则所选限制酶切点应位于T-DNA片段中。从而有利于将目的基因嵌入到T-

部

DNA片段上，因为Ti质粒的T-DNA片段最容易转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。如

内

用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。如果利用

物

该片段构建基因表达载体，则下图中甲、乙、丁，Ti质粒均不宜选择，而丙Ti质粒宜选取。（分析如下）

生

姐