免疫学检测技术的基本原理课件.ppt

免疫学诊断2012单向琼脂扩散试验免疫学诊断2012双向琼脂扩散试验免疫学诊断2012免疫电泳(immunoelectrophoresis)免疫学诊断2012对流免疫电泳免疫学诊断2012火箭电泳免疫学诊断2012测吸光度抗体抗原免疫复合物的浓度与透射光的衰减呈正相关。免疫比浊法原理免疫学诊断2012(2)免疫荧光技术是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素、藻红蛋白等.免疫学诊断2012直接荧光法：检测不同的抗原，需要不同的特异性荧光抗体间接荧光法：用一抗与样本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。此方法既可检测抗原又可检测抗体。若查抗原，一抗为已知的；若查抗体，抗原是已知的。一种荧光抗体可用于多种不同抗原的检测免疫学诊断2012(3)放射免疫测定法(RIA）：是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。将同位素的敏感性与抗原抗体结合的特异性结合起来，具有重复性好、准确性高等优点.用于激素、药物等微量物质的检测，敏感性可达到pg/ml水平。常用的放射性核素有131I和125I等。免疫学诊断2012(3)化学发光免疫技术（CLIA）：将化学发光（如鲁米诺）分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。特点：灵敏度高、特异性强分离简便、自动化分析。免疫学诊断2012（4）免疫胶体金技术（ICS）：用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。免疫学诊断2012（5）免疫印迹技术又称Westernblotting，是将十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离得到的蛋白转移到固相载体膜上，再用标记的特异性抗血清或单克隆抗体对蛋白质进行定性及定量分析的技术。敏感性为1～5ng。免疫学诊断20124、蛋白质芯片技术常用于微生物感染的检测。其原理是将各种蛋白质固定于载体上制成芯片，再用荧光标记抗体与芯片作用，洗去未结合的抗体后，用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术测定芯片上各点荧光强度，以此检测荧光对应的抗体及其相互结合的程度。免疫学诊断2012三、免疫细胞的测定人的免疫细胞测定：外周血动物的免疫细胞测定：外周血、胸腺、脾脏与其他组织。常用的方法：葡萄糖-泛影葡胺密度梯度离心法。㈠外周血单个核细胞的分离㈡淋巴细胞及其亚群的分离1.免疫吸附分离法:获得不同的T细胞亚群2.免疫磁珠分离法：获得不同表面标志的活T细胞亚群.3.免疫磁珠法4.抗原肽-MHC分子四聚体技术免疫学诊断2012免疫吸附分离法：将已知抗淋巴细胞表面标志的抗体包被聚苯乙烯培养板，加入淋巴细胞悬液，表达相应细胞表面标志的淋巴细胞可被吸附在培养板上，即可与其他细胞分开。免疫学诊断2012免疫吸附分离法加入淋巴细胞悬液anti-CD4anti-CD4anti-CD4弃上清免疫学诊断2012免疫磁珠法:应用较广泛是一种特异性分离所需淋巴细胞的方法。首先将特异性抗体（如抗CD3、抗CD4或抗CD8等）吸附在磁性微珠上，与待测细胞悬液中的相应细胞特异性结合后,再将磁珠结合细胞与未结合磁珠细胞分开，即可获得纯度高的所需细胞。免疫学诊断2012磁珠分离法荧光激活细胞分选仪分离法：（流式细胞术分离法）是一种集光学、流体力学、电力学和计算机技术于一体，可对细胞进行多参数定量测定和综合分析方法.⑴定量分析活细胞表面表达的特异分子⑵免疫细胞分析和细胞计数。⑶白血病和淋巴瘤的免疫学分型。⑷细胞周期和细胞凋亡检测。免疫学诊断2012流式细胞术荧光抗体标记混合细胞喷嘴单细胞悬液5000-10000个/秒细胞分选器荧光检测器免疫学诊断2012抗原肽-MHC分子四聚体技术将特异性抗原肽段、可溶性MHC-Ⅰ类分子重链及β2微球蛋白在体外正确折叠，在亲和素存在下构建四聚体，并结合流式细胞仪定量检测外周血及组织中抗原特异性CTL的比率。免疫学诊断2012淋巴细胞及其亚群的分离免疫细胞功能测定磁珠分离法免疫吸附分离法流式细胞术肽—MHC四聚体技术T细胞功能测定B细胞功能测定细胞因子检测T细胞增殖试