专题十二+基因工程(含PCR和电泳视频)-高考生物二轮复习热点专题专项突破.pptx

专题十二:基因工程

概念5基因工程赋予生物新的遗传特性

5.1基因工程是一种重组DNA技术

5.2蛋白质工程是基因工程的延伸

统览全局

基因工程长句表达必背

1．载体必须具备的条件：①能在受体细胞中保存下来并能自我复制；②具有1个或多

个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。③具有标记基因。（P72）

2．PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提

供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技

术。（P77）

3．PCR反应过程可以在PCR扩增仪（PCR仪）中自动完成，完成以后，常采用琼脂糖

凝胶电泳来鉴定PCR的产物。（P79）

4．基因表达载体要包括以下四个基本的结构：目的基因、启动子、终止子、标记基因。

（P80）

5．构建基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代，

同时，使目的基因能够表达和发挥作用。（P80）

6．启动子位于目的基因的上游，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。（P80）

7．标记基因的作用：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细

胞筛选出来。（或供重组DNA的鉴定和选择）。

8．检查转基因抗虫棉是否培育成功，首先是分子水平的检测，包括通过PCR等技术

检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因是否转录出了mRNA；从

转基因棉花中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交，检测Bt基因是否翻译

成Bt抗虫蛋白等。

其次，还需要进行个体生物学水平的鉴定。例如，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫

来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度。（P82）

9.PCR反应需提供分别与DNA两条链结合的两种引物，引物的作用是：使DNA聚合

酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。（P77）

Ⅰ.基因工程的理论基础

Ⅱ.基因工程的基本工具

磷酸二酯

黏性

能力训练：

1.图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，

neor表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是(C)

A．图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团

B．在构建重组质粒时，可用PstⅠ和BamHⅠ切割质粒和外源DNA

C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，可以保证目的基因与质粒正确连接

D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长

2.研究人员利用一种从鱼体内分离出的抗冻基因，培育出抗冻番茄植株，使得其幼苗

的致死低温下降了2℃。具体研发过程如下图(其中AmpR为氨苄青霉素抗性基因)。

回答下列问题：

(1)不用限制酶AluⅠ切割鱼抗冻基因的原因是AluⅠ酶会破坏鱼抗冻基因，选择

SmaⅠ和PstⅠ两种限制酶切割鱼抗冻基因和质粒，而不是只选择PstⅠ一种酶切割

抗冻基因和质粒的优点是可防止目的基因和质粒反向连接，防止目的基因、。

质粒自身环化

(2)研究人员用SmaⅠ和PstⅠ两种限制酶切割抗冻基因和质粒，获得含抗冻基因的重

组质粒后，又用不同的限制酶对原质粒和重组质粒进行酶切，获得片段大小如下表：

(1kb＝1000bp，1bp为一个碱基对，注意：DNA片段大小与图中所画比例一致)

限制酶AluⅠSmaⅠ和PstⅠ

原质粒7.7kb2.3kb、5.4kb

重组质粒3.0kb、4.8kb

由表中数据可知，鱼抗冻基因的长度为_2__.4__k__b_，若不考虑终止密码子，抗冻基因合

成的抗冻蛋白最多由___8_0_0___个氨基酸组成

难点突破：1.限制酶的选择原则

（1）根据目的基因确定限制酶

①应选择位于目的基因两端的限制酶；

②不能选择目的基因内部的限制酶。

（2）根据质粒的特点确定限制酶

①通常选择与切割目的基因相同的限制酶，

确保出现相同的黏性末端；

②在只有一种标记基因时，选择的限制酶

不能破坏标记基因。

难点突破：1.限制酶的选择原则

Ⅲ.基因工程的基本操作程序

1.目的基因的筛选与获取

Ⅲ.基因工