DB21_T3367—2021_海洋生物体中皮质醇的测定_辽宁省.docxVIP

ICS67.050

DB21

CCSB50/59

辽宁省地方标准

DB21/T3367—2021

海洋生物体中皮质醇的测定

Determinationofhydrocortisoneinmarineorganism

辽宁省市场监督管理局

发布

DB21/T3367—2021

前

言

本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则编写。

本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。

本文件主要起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院、大连海关技术中心、大连海洋学校

本文件主要起草人：刘桂英、王琦、葛坤、田金、宋广军、胡超魁、邵泽伟、李安龙

本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，

我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅农产品质量安全监管局（沈阳市和平区太原北街2号综

合楼A座），联系人：马京京，联系电话：024子邮箱：lnncpjg@163.com

文件起草单位通讯地址：辽宁省海洋水产科学研究院（大连市沙河口区黑石礁街50号），联系电话：

0411

I

DB21/T3367—2021

海洋生物体中皮质醇的测定

1

范围

本文件规定了海洋生物体中皮质醇检测的原理、试剂、仪器和设备、样品前处理、样品测定与结果、

方法灵敏度、准确度和精密度。

本文件适用于鱼类、虾类、棘皮类、贝类生物体中皮质醇的测定。

2

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

GB/T30891水产品抽样规范

3

方法原理

生物样品中的皮质醇，用0.2%甲酸乙腈溶液提取，固相萃取柱净化、浓缩，超高效液相色谱质谱

4

4.7标准品：皮质醇（hydrocortisone，C21H30O5，CAS号50-23-7，纯度98%以上）。

4.8标准贮备溶液（10mg/L）：准确称取1.00mg皮质醇标准品，用乙腈稀释至10mg/L，避光贮存

在-18℃下。

标准溶液(1mg/L)：准确吸取标准贮备溶液1mL于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，避光冷

4.10针孔式微孔滤膜：0.22μm，有机系。（亲水性聚丙烯、玻璃纤维、亲水性PTFE、聚醚砜或其

5

1

DB21/T3367—2021

5.1超高效液相色谱质谱联用仪：配有电喷雾离子源、三重四级杆。

5.2

5.3

固相萃取装置：固相萃取柱，CaptivateEMR（200mg，6cc）。

离心机：转速：5000r/min。

5.4分析天平：感量0.0001g和感量0.01g。

5.5

5.6

5.7

5.8

高速组织捣碎机。

均质机。

氮吹仪。

涡旋混匀仪。

6

测定步骤

6.1

样品制备与保存

6.1.1

6.1.2

水产品的试样抽取：按GB/T30891的规定执行。

水产品试样制备：取样品约100g，用高速组织捣碎机充分捣碎，均质机混匀，均分成2份，

一份用于检测，另一份作为留样。

6.1.3

样品于-18℃下冷冻避光存放。

6.2

提取

称取样品5.00g，置于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入10mL的0.2%甲酸乙腈溶液，充分摇匀，

涡旋，加入1g的氯化钠和4g的无水硫酸钠，充分涡旋混匀1min，超声10min，静置，以5000r/min

4℃离心15min，取上清液4mL，放入空的聚丙烯塑料离心管中，加入1mL水，混匀，待净化。

将待净化溶液全部倒入固相萃取柱，保持约每秒一滴的流速，收集全部流出液(抽干)，45℃水浴浓

缩氮吹仪氮吹至液面高度恒定，用水定容至1mL，上清液经有机滤膜0.22μm过滤至进样瓶中，供超高

效液相色谱质谱联用仪检测。

—流速：0.2mL/min。

表1

2

DB21/T3367—2021

4.00

5.00

6.00

10

90

90

90

10

10

—电离模式电喷雾电离，正模式。

—扫描模式：多反应监测（MRM）模式，监测离子对（m/z）参见表2。

表2

质谱条件

化合物

离子模式

分子离子对

驻留时间

锥孔电压

碰撞能量

m/z

s

V

eV

22

16

363.2121

＊

0.163

42

42

皮质醇

ESI

+

363.2327

＊

代表定量离子

6.5

标准曲线的绘制

吸取标准溶液（4.9）5mL，用流动相逐级稀释，配制成浓