细胞凋亡形态学观察.pptxVIP

细胞凋亡（apoptosis）的命名主要是根

据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或

树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋

亡的认识正不断得到深化，检测凋亡细胞

的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定

细胞凋亡的最可靠的方法。

一、光学显微镜观察

凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密

质块，有时可碎裂。在HE染色的组织切片中细胞体

积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，并可形成凋亡

小体。在组织中凋亡细胞常以分散单个形式存在，凋

亡细胞与周围细胞分离，不引起炎症反应。

本方法简便易行，但在细胞密集的组织中对于改变不

典型的细胞判断较困难，常缺乏较为特征的指标，具

有较强的主观性，重复性差。本方法可用于调亡现象

的初步观察，作为分析指标之一。

l检测方法：

细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染

色，在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变，结

合显微测量工具可作凋亡细胞计数。

二、视频时差显微技术（videotime-lapse

microscopy）

本方法用于细胞培养，通过相差显微镜可动态观察

细胞凋亡的变化过程，尤其是观察细胞表和外形的

变化。凋胞与基质分离，胞体变圆、收缩、出泡，

有的细胞拉长，出现钉状突起，特续数小时后细胞

膜破裂，细胞溶解，通过连续观察，本方法可养壑

培养中的凋亡细胞，但不能用于病理组织。

l检测方法：

收集2×105细胞/ml培胞，置于多孔培养板，加入凋亡诱

导剂，在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞

的动态改变，每隔分钟30秒作序列摄影，连续24小时。

如同进进行荧光染色，可参荧光晃微镜下观察和摄影。

三、电子显微镜观察

关于凋亡细胞的超微结构特征，包

括透射电镜和扫描电镜下的改变，

在许我文献中已有详尽描述。凋亡

细胞的典型形态改变如胞质的固缩，

染色质浓缩成半月形或帽状附于核由于样品范围局限，在凋亡细胞数

膜，核的碎裂和凋亡小体形成等，较少时需进行大量的观察才能观察

在透射电镜下得到最佳的体现。为到典型的凋亡改变。

凋亡细胞判定提供了最可靠的依据。

本方法的缺点是样品制作过程较复

杂，且仪器、设备的费用昂贵，较

难广泛大量开展。

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还应指出的是，在观察体外培一些不典型的改变容易被忽略，

养的凋亡细胞时，常可见到各在观察时要特别予以注意。

阶段的改变，并可见到较多典

型的凋亡细胞时，常可见到各

阶段的改变，并可见到较多典

型的凋亡小体很少见到，出现

较多的是凋亡初期胞体收缩、

染色质边聚和后期凋亡小体

（或整个凋亡细胞）被吞噬和

降解的现象。

l检测方法：

透射电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定，丙酮脱水，环氧

树脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸电子又重染色，透射电

镜观察。扫描电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定，乙醇逐

级脱水，CO2临界点干燥，真空喷金，扫描电镜观察。

流式细胞仪检测凋亡细胞是通过检查其光射特征

及荧光参数时行的。细胞穿过流式细胞仪的激光

束集点时使激光发生散射，分析散射光可以提供

细胞大小及结构的信息。散射光包括前向散射光

和左向角散射光两种，前向散射光的强度与细胞

大小、体积相产，右向角射光的强度与细胞结构

的析射性、颗粒性（granu-larity）有关。

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细胞凋亡过程中出现的形态改变如细胞皱缩、胞膜起泡、

核浓缩和碎裂等可以使光散射特性发生改变。早期凋亡细

胞主要表现为前向散射光减弱而右向角散射光增强或不变，

前者反映了细胞的皱缩，后者反映了细胞的核逐缩及碎裂。

晚期凋亡细胞的前向散射光和右向角散射光均减弱。

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由于光散射牧场生并非凋亡细胞的特异性指标，细胞的机

械性损伤和细胞坏死也可以使前向散射光减弱。因此，只

有将光散射特性的检测与荧光参