DB45T 2031-2019 甘蔗白叶病植原体巢式PCR 检测技术规程.pdfVIP

ICS65.020.01

B16

DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T2031—2019

甘蔗白叶病植原体巢式PCR检测技术规程

DetectingtechniqueregulationsforphytoplasmaofSugarcaneWhiteLeafbasedon

NestedPCR

2019-12-05发布2019-12-30实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T2031—2019

前言

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本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由广西壮族自治区糖业办公室提出并监督实施。

本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所、广西甘蔗遗传改良重点实验室。

本标准主要起草人员：韦金菊、宋修鹏、刘昔辉、覃振强、张小秋、李杨瑞、张荣华、桂意云、魏

春燕、刘丽敏、吴建明、颜梅新、刘璐。

I

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DB45/T20312019

甘蔗白叶病植原体巢式PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了甘蔗白叶病植原体（SugarcaneWhiteLeafPhytoplasma）巢式PCR检测的原理、试

剂、主要仪器与设备、样品的采集保存与运输、检测方法和结果描述及判定。

本标准适用于甘蔗白叶病病原菌植原体引起的病害及病原物的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

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GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T28067甘蔗黄叶病病毒实时荧光RT-PCR检测方法

NY/T2743甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程实时荧光定量PCR法

3原理

巢式PCR(NestedPolymeraseChainReaction)是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而

非一对）PCR引物扩增完整的片段。利用植原体16SrRNA基因序列通用引物P1/P7和R16F2n/R16R2，作为

巢式PCR的外侧和内侧特异引物对，可用于甘蔗白叶病植原体的快速检测。巢式PCR可增加PCR检测的灵

敏度和反应特异性。

4试剂

4.1所使用试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682—2008的二级水指标，其中涉及PCR的用水

应符合一级水指标。

4.2液氮。

4.3植物基因组DNA提取试剂盒。

4.4GelRed核酸染料。

×

4.52EasyTaqPCR反应预混液。浓度为10mmol/L，其中含有0.05U/μLTaqDNAPolymerase、0.4

2+

MmdNTPMixture、4mMMg、2×PCRBuffer。

4.61×TE缓冲液：市售产品。

4.71500bpDNA分子质量标准物。

4.8琼脂糖，电泳级。

4.9内外检测引物序列：

a)外引物对：

1)P1：5‘-AAGAGTTT