DB22_T1609-2012_动物尿液中β-受体激动剂测定酶联免疫法_吉林省.docxVIP

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DB

备案号：35743-2013

吉

林

省

地

方标准

DB22/T1609—2012

动物尿液中β-受体激动剂测定

酶联免疫法

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T1609—2012

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、珲春出入境检验检疫局、白城出入境

检验检疫局。

本标准主要起草人：胡婷婷、李玲、张琦、杨帆、张勋、杨璐、冯博。

I

DB22/T1609—2012

动物尿液中β-受体激动剂测定酶联免疫法

1范围

本标准规定了动物尿液中β-受体激动剂残留量的酶联免疫测定方法。

本标准适用于动物尿液中克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗、马布特罗、马喷特罗、特布他林及卡布

特罗残留定性的快速筛查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

检测的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对沙丁胺醇抗体的捕获抗体。加入沙丁胺醇抗体后，

会与捕获抗体结合。经过孵育及洗板步骤后，加入标准品、样品溶液及沙丁胺醇酶标记物（酶连接物），

样品中的β-受体激动剂与沙丁胺醇酶连接物竞争沙丁胺醇抗体的连接位点（竞争性酶联免疫法）没有连

接的沙丁胺醇酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶连接物将

发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处测量，吸光度值与

样品中的β-受体激动剂浓度成反比。几种待测物交叉反应率应不低于50%。

4.5β-受体激动剂检测试剂盒：应在有效期内使用，保存于2℃-8℃。不同批次的试剂盒不可混用。

4.5.1β-受体激动剂系列标准溶液：浓度依试剂盒要求确定。

4.5.2酶标板。

1

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4.5.3抗体。

4.5.4酶标记物。

4.5.5底物/发色剂。

4.5.6反应终止液。

4.5.7样品稀释缓冲液。

4.5.8洗涤缓冲液。

5仪器与设备

5.1酶标仪：配备450nm滤光片。

5.2微量加液器：单道20μL-200μL，200μL-1000μL微量加液器，多道50μL-250μL微量加液器。

5.3振荡器。

5.4涡旋振荡器。

5.5天平：感量为0.01g。

5.6高速离心机。

6.2.1制备酶标记物和抗体使用液：1：10稀释酶标记物和抗体，如取200μL酶标记物及2mL样品

稀释缓冲液（4.5.7）稀释并混合均匀。

6.2.3倒出孔中液体，每孔加入洗涤缓冲液（4.5.8）250μL，弃去孔中液体，再将酶联板倒置在滤纸

上拍打，重复洗板3次。

6.2.6加入100μL底物/发色剂（4.5.5）到各微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在室温（20℃-25℃）

下暗处孵育15min。

6.2.7加入100μL反应终止液（4.5.6），在450nm处测定吸光度值。

2

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7结果计算和表述

7.1计算相对吸光度值

分别计算标准和样品的平均吸光值。按式（1）计算标准液和样液的相对吸光度值。

X=B′100%………（1）

B

0

式中：

X——相对吸光度值；

B——标准液或样液的平均吸光度值；

B0——0μg/L标准液的平均吸光度值。

7.2绘制标准曲线

以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数值（log10）为横坐标绘制标准曲线。每次试验均需重

新绘制标准曲线。

7.3样品结果计算

通过标准曲线可以计算出样品的浓度值；

X=C′n……………（2）

式中：

X——样品待测组分的量，单位为微克每千克（μg/kg）；

C——样品待测组分的浓度；

本方法的β-受体激动剂残留量的筛查范围为0.3μg/kg～16.2μg/kg。

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