DNA的粗提取与鉴定-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修三.pptxVIP

如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢?;

1.掌握DNA粗提取与鉴定的实验原理

2.理解并掌握DNA粗提取的过程与鉴定的方法;

自学指导：阅读课本P74-75内容，回答下列问题(4min)

1.该实验的实验目的、实验原理、实验材料、试剂及其作用分别是?

2.该实验的方法步骤可以简单的归纳为哪四步?

3.研磨的目的是?

4.如何取上清液(两种方法)?

5.上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质?低温放置几分钟的作用是?

6.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的目的是?;

与蛋白质。最低。利用这一原理，可以使

(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，DNA在盐溶液中溶解或析出。

溶解度

2.鉴定DNA的原理

在一定温度下(沸水浴),DNA遇_二苯胺试剂会呈现蓝色

0.14mol/L2mol/LNaCl浓度;

探究和实践DNA的粗提取与鉴定

二、目的要求：1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。

2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA进行鉴定。

三、材料用具：

1.材料：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 (注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。);

探究和实践的粗提取与鉴定

2.试剂及作用(1)研磨液——溶解并提取DNA

(2)体积分数为95%的酒精—析出DNA

(3)2mol/L的NaCl溶液—溶解DNA

(4)二苯胺试剂—鉴定DNA,要现配现用

(5)蒸馏水滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L,从而;

通;

探究和实践DNA的粗提取与鉴定

四、方法步骤(四目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中

1.研磨洋葱：称取约30总，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL_研磨液，充分研磨。

2.去除杂质，取上清液：上清液中除DNA之外，可能含有核蛋白、多糖等杂质

方案一：在漏斗中垫上纱布，将洋仅过滤到烧杯中，在4℃

冰箱中放置几分钟后，再取上清液。

方案二：也直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min的

转速下离心上清液放入烧杯中。

抑制核酸水解酶的活性，???而抑制DNA降解；抑制

DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；过滤取上清液;

方案一：在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分

数为95%),静置2～3min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子

方案二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心

5min,弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。;

取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物

或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4mL的_二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

空白对照组如何设计?;

探究和实践DNA的粗提取与鉴定

(1)选什么样的材料实验更易成功?用洋葱做材料，为什么要充分研磨?

含DNA的生物材料都可以，选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。

充分研磨，可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA。

(2)猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料?操作时如何防止血液凝

固?

猪血(哺乳动物的成熟红细胞)无细胞核，不适合；

鸡血中红细胞有核DNA,且核DNA的量较多，适合。

鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。

(3)如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA吗?

加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。那猪肝呢?;

1、操作提示

(1)以血液为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血

液凝固

O

(2)加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

2、关键点拨

1.利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可