DB22_T1606-2012_副猪嗜血杆菌病诊断技术规程_吉林省.docxVIP

ICS11.220

B41

DB22

备案号：35740-2013

吉

林

省

地

方

标

准

DB22/T1606—2012

副猪嗜血杆菌病诊断技术规程

TechnicalspecificationofdiagnosisforHaemophilusparasuis

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T1606—2012

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本标准主要起草人：孟日增、石建平、孟庆峰、宋战昀、蔡阳、王振国、王伟利、肖成蕊、王为。

I

DB22/T1606—2012

副猪嗜血杆菌病诊断技术规程

1范围

本标准规定了副猪嗜血杆菌病的综合诊断技术（临床诊断、病原分离鉴定、聚合酶链式反应、间接

血凝试验）。

本标准适用于养猪场或散养猪副猪嗜血杆菌病现场诊断与实验室诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程

NY/T541动物疫病实验室检验采样方法

副猪嗜血杆菌，其病原特征参见附录A，该菌只感染猪，常感染2周龄～16周龄的猪，5周龄～8周

龄的猪更易感。该病主要通过呼吸系统传播，猪与猪之间的接触及排泄物亦可传播，主要传染源为病猪

和带菌猪。该病发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达到50%。

急性病例表现为发热、食欲不振和厌食，严重时可见呼吸困难、发绀、不愿活动、关节肿胀、跛行、

运动不协调以及死亡。病程较长猪只的体温大都正常，常表现为食欲不振、消瘦、被毛粗乱，其行为主

要表现为跛行、关节肿胀。急性发病耐过猪可以痊愈，但病症严重，猪耐过后往往表现慢性病症，主要

是被毛粗乱、咳嗽、呼吸困难和生长迟滞。有些猪由于发生脑膜炎而表现肌肉震颤、麻痹和惊厥，有些

因腹膜粘连而常引起肠梗阻。

剖检可见浆液性或纤维素性胸膜炎、腹膜炎、心包炎、关节炎及脑膜炎，损伤或渗出可波及关节表

面，尤其是腕关节和跗关节。肺脏出血、表面有纤维素性渗出物附着，全身淋巴结水肿、出血。在显微

镜下观察渗出物，可见纤维蛋白，中性粒细胞和较少量的巨噬细胞。病死猪及病料的处理应符合GB

16548的规定。

1

DB22/T1606—2012

4.1.1水

为符合GB/T6682的灭菌二级水。

4.1.2培养基

巧克力琼脂，鲜血琼脂培养基，大豆酪蛋白琼脂固体培养基（TSA），胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）。

4.1.3标准菌株

副猪嗜血杆菌标准菌株，由指定单位提供。

4.2仪器

4.2.1恒温培养箱：35℃±1℃。

4.2.2灭菌培养皿：直径90mm至100mm。

4.2.3细菌微量生化鉴定管。

4.2.4灭菌棉拭子。

4.3病料采集

按NY/T541规定的方法，采集病料。病料可包括呼吸道分泌物或具有病变特征的肺脏、肝脏、脾脏、

胸膜、胸腹腔渗出浆液、心包积液、心血、关节液和脑组织。

4.4.1采集样品，首先在巧克力琼脂平板、TSA固体培养基、鲜血琼脂平板上分别划线接种，37℃培

养48h～72h以后挑取单个菌落，再进行纯培养并鉴定。

挑取被检分离株和副猪嗜血杆菌标准株菌落接种绵羊鲜血琼脂平板和2%胨琼脂平板上，再以金黄色

葡萄球菌点种或垂直划线，置37℃培养48h。

观察葡萄球菌菌落周围菌落生成情况，如愈靠近金黄色葡萄球菌菌落愈大，菌落呈圆形、隆起、闪

光、半透明；离葡萄球菌愈远则菌落愈小，甚至不见菌落生长，且不出现溶血现象判为阳性。

脲酶试验、氧化酶试验、吲哚试验均阴性，并且接触酶、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖、核糖、半

乳糖、硝酸盐还原试验均阳性者判为副猪嗜血杆菌阳性。

2

DB22/T1606—2012

对分离菌株接种4周龄～6周龄非免疫猪，临床观察符合3.2且与病理剖检变化符合3.3，采集病料分

离培养满足4.5.1与4.5.2，则可判为动物回归试验阳性。

4.5.4

结果判定

经生长特性试验、生化试验、动物回归试验检测确定均为阳性者，可判为副猪嗜血杆菌分离阳性。

5聚合酶链式反应（PCR）

5.1试剂与材料

5.1.1对照品

副猪嗜血杆菌标准菌株DNA提取物为阳性对照，水作为阴性对照。

5.1.2rTaq酶

5U/μL，保存于-20℃，避免反复冻融或温度剧烈变化，随用随取。

5.1.310倍PCR缓冲液

Mg2+浓度25mmol