项目八细菌平板划线分离技术.pptxVIP

细菌平板划线分离技术;训练目标;考纲要求;;;概述;病料、实验用菌种、营养琼脂培养基、接种环、酒精灯、火柴、试管架、培养箱、记号笔、烙刀、镊子、剪子、乳胶手套、消毒棉球等。;;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;固体培养基;操作前的准备;内、外、夹、弓、大、立、腕;操作前的准备;操作前的准备;操作前的准备;进入实验室前应先洗手、戴上已经消毒好的口罩、帽子（或头罩），穿上实验服和无菌拖鞋。操作者再次消毒双手后戴上无菌手套（橡胶手套）方可进入微生物实验室。

1.工作台消毒

取酒精棉球对操作台进行消毒。注意消毒时酒精棉球应按照一定的顺序擦拭操作区域（从左到右依次消毒，擦拭台面不可重复，面积与肩同宽，棉球不得往返使用）。用后的棉球放入废弃缸内，操作台消毒完毕后再次夹取酒精棉球对操作者手套进行消毒。

;;;①新购置的酒精灯应首先配置灯芯。灯芯通常是用多股棉纱线拧在一起，插进灯芯瓷套管中。灯芯不要太短，一般浸入酒精后还要长4～5cm。

②对于旧灯，特别是长时间未用的灯，在取下灯帽后，应提起灯芯瓷套管，用洗耳球或嘴轻轻地向灯内吹一下，以赶走其中聚集的酒精蒸气。再放下套管检查灯芯，若灯芯不齐或已烧焦都应用剪刀修整为平头等长。

③灯壶内酒精少于其容积1/3（1/4）的都应添加酒精。酒精不能装得太满，以不超过灯壶容积的2/3为宜。（1/4-2/3）（酒精量太少则灯壶中酒精蒸气过多，易引起爆燃；酒精量太多则受热膨胀，易使酒精溢出，发生事故）。添加酒精时一定要借助一个小漏斗，以免将酒精洒出。燃着的酒精灯，若需添加酒精，必须熄灭火焰。决不允许燃着时加酒精，否则，很易着火，造成事故。万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，要立即用湿棉布铺盖灭。;④新灯加完酒精后须将新灯芯放入酒精中浸泡，而且移动灯芯套管使每端灯芯都浸透，然后调好其长度，才能点燃。因为未浸过酒精的灯芯，一经点燃就会烧焦。

⑤点燃酒精灯一定要用燃着的火柴，决不能用一盏酒精灯去点燃另一盏酒精灯。否则易将酒精洒出，引起火灾。（有时用打火机也行，但较容易烧到手，不提倡，不过在没有火柴的情况下也可以用打火机，实验操作考试时必须用火柴）

⑥酒精灯灯焰分为外焰、内焰、焰心三部分，在给物质加热时，一般用温度最高的外焰进行消毒或加热。加热的器具与灯焰的距离要合适，过高或过低都不正确。与灯焰的距离通常通过灯的垫木或者铁环的高低来调节。被加热的器具必须放在支撑物(三脚架、铁环等)上或用坩埚钳、试管夹夹持，决不允许徒手拿仪器加热。

⑦用灯帽将其盖灭，熄灭后需再重盖一次，一是检查熄灭没有，二是放走酒精蒸汽，让空气进入，免得冷却后盖内造成负压使盖打不开。决不允许用嘴吹灭，以免引起灯内酒精燃烧，发生危险。

;⑧不用的酒精灯必须将灯帽罩上，以免酒精挥发，因为酒精灯中的酒精，不是纯酒精，所以挥发后，会有水在灯芯上，致使酒精灯无法点燃。

⑨酒精灯不用时，应盖上灯帽。如长期不用，灯内的酒精应倒出，以免挥发；同时在灯帽与灯颈之间应夹小纸条，以防粘连。

⑩要用酒精灯的外焰加热，给玻璃仪器加热时应把仪器外壁擦干，否则仪器炸裂，给试管中的药品加热，首先必须预热，然后在对着药品部位加热。加热时不能让试管接触灯芯，否则试管会炸裂。;;3.接种环灭菌：

接种环是细菌培养时常用的一种接种工具，由镍合金丝制成，分为接种环、金属杆和绝缘柄三部分。广泛应用在微生物检测、细胞微生物、分子生物学等众多学科领域。

①从试管架上选取平整、圆滑的接种环。

②右手采用执笔式（拿毛笔）手持接种环绝缘柄，直立于火焰外焰，先灼烧整个环端及螺口，充分烧红。

③再将金属杆部分在外焰水平方向来回通过三次灼烧灭菌。

④灼烧灭菌后的接种环在火焰旁稍冷后方可使用。

⑤使用后的接种环同样需在酒精火焰上灼烧灭菌后放置或继续使用。;3.接种环灭菌：

使用后的接种环灭菌方法：

当接种环上菌体较多时，假如直接进行高温灼烧会使菌体急速受热形成气溶胶喷溅，污染空气和操作台面，既会影响无菌操作的效果，也可能引起操作者的感染。其灭菌方法是：

①先斜持接种环约30°置于酒精灯内焰附近进行加热(也可将接种环置于离外焰一定距离处烘烤)，此处温度相对较低，不会引起菌体快速受热形成气溶胶喷溅；

②待菌体受热完全干燥以后(根据经验估计时间)，再按照上述方法灼烧灭菌。

值得注意的是，当接种环上液体较多时，受热后液滴炸裂更易形成微生物气溶胶??通常需要先用吸水纸吸干再灼烧灭菌。现在也有专门的红外接种环灭菌器，完全替代酒精灯，方便快捷。;可见，接种环灼烧灭菌操作的每一个步骤都有其重要作用，不可随意省略或颠倒。规范化的操作有利于科学态度和科学素养的培养，使学生形成严谨治学的科学作风，对以后的发展大有裨益。;接种环