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黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化
目录
黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化（1）．．．．．．．．．．．．．．．．4
一、内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1脂肪酶概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.2黑曲霉脂肪酶的特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.3研究目的与价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
二、黑曲霉脂肪酶基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
2.1基因组DNA的提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
2.2脂肪酶基因的PCR扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
2.3基因的序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
2.4重组质粒的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
三、异源表达系统的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
3.1常见异源表达系统概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
3.2表达系统的筛选与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
3.3表达系统的优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
四、黑曲霉脂肪酶基因异源表达的实现．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
4.1表达载体的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
4.2重组蛋白的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
4.3表达产物的鉴定与表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
五、表达技术优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
5.1表达条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
5.2发酵过程控制策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
5.3蛋白质纯化方法的改进．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
六、实验结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
6.1实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
6.2结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
七、讨论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
7.1研究成果总结．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
7.2技术优化对黑曲霉脂肪酶表达的影响分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
7.3未来研究方向与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
八、结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
8.1研究结论汇总．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
8.2研究成果的应用前景与价值评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化（2）．．．．．．．．．．．．．．．45
一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
（一）研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
（二）研究目的与内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
二、黑曲霉脂肪酶基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
（一）黑曲霉脂肪酶基因简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54
（二）基因克隆策略选择．．．．．．．．．．．．．．．．
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